病理学技术考点总结.docVIP

酶组织细胞化学技术 酶组织化学技术的基本原理及方法 1、金属沉淀反应 ，如硫代胆碱铜法，可证明胆碱酯酶和酯酶； 2、藕联偶氮色素法 3、色素形成与染色法 一 碱性磷酸酶（AKP） AKP最适宜PH值为9.2-9.4，可被金属阳离子或某些氨基酸激活，多见于活跃的部位，如小动脉、肾小管上皮等。 AKP染色方法 1、Gomri钙钴法：AKP为黑色 注意事项：此法对含铁血黄素和钙盐也可形成棕黑色沉淀，必要时应予以鉴别。并且用于透明的二甲苯为AR级别。 2、Gossrau偶氮吲哚酚法：酶活性部位呈暗褐色（坚牢蓝VB）、浅红色（坚牢蓝BB）、蓝色（坚牢紫B） 二 酸性磷酸酶（ACP） ACP前列腺活性最强，在肝脏内毛细胆管旁活性最强。 ACP染色方法: Berry硝酸铅法：ACP为棕黑色，特异性抑制酶是氟化钠。 Leder-Stutt改良萘酚AS-TR磷酸酯法：ACP为红色。 三 三磷酸腺苷酶（ATP） ATP分为三类：膜性ATP、肌球蛋白ATP、线粒体ATP，以上三种酶不可用甲醛固定，用冷冻法。 膜性ATP 肌球蛋白ATP 线粒体ATP 激活剂 Na+、K+ Ca+ Mg+ 抑制剂 Ca+ Mg+ Ca+ PH值 7.2-7.5 9.0-9.4 存在部位 肝脏毛细胆管 近曲小管刷状缘 毛细血管等 心肌 其次是骨骼肌 ATP染色方法： Wachstein-Meisel镁激活酶法：ATP为棕黑色。 Dubowitz-Brooke钙激活酶法：ATP为棕黑色。 注意事项：镁激活的ATP正常肝定位于毛细胆管；钙激活ATP区分于红肌纤维和白肌纤维有意义，对于区分神经性肌萎缩和肌源性肌萎缩有价值。 四 胆碱酯酶（CHE） 广义胆碱酯酶分为胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶，胆碱酯酶的活性中心是丝氨酸，主要分布于血浆、胰腺和唾液腺；乙酰胆碱酯酶主要分布于神经肌肉接头等处。 CHE染色法 Snell-Garrett胆碱铜法：CHE呈黄色或棕黄色。 Karnovsky-Roots铁氰化铜法：CHE呈红棕色或深棕色。 核酸分子杂交技术 核酸分子杂交技术：具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。Southern 杂交Northern 杂交原位杂交（ISH）荧光原位杂交（FISH）芯片杂交（属于固一液相杂交） 免疫组织化学技术在病理诊断中的应用 细胞凋亡检测技术 组织取材固定及切片技术 组织固定 一 单纯组织固定液 1、甲醛 渗透力强，固定均匀，组织收缩小，但经乙醇脱水后收缩较大。非沉淀性固定剂。 注意事项：甲醛长时间存放容易氧化成蚁酸，蚁酸与组织中的血红蛋白形成甲醛色素。 除去甲醛色素的方法：Schridde法：75%的乙醇200ml，加浓氨水1ml。切片脱蜡后处理30min；Verocay法：80%乙醇100ml和1%氢氧化钠1ml配置而成，切片脱蜡后处理。 2、重铬酸钾 常用1%-3%作为固定剂。未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可以使蛋白质变为脂溶剂，用于固定高尔基体和线粒体；醋酸化的重铬酸钾可以使蛋白质沉淀，此时染色体可以保存，但线粒体破坏。重铬酸钾不能与还原剂混合，其常用于配置混合固定液，如Zenker液、Helly液、Maximov液、Regaud液。（hmrz液） 3、苦味酸 易燃易爆，饱和溶液储藏，常用饱和溶液作为固定剂。能沉淀一切蛋白质，穿透慢，组织收缩明显，对脂类无固定作用，苦味酸可以软化火棉胶和皮肤，苦味酸固定后放入70%的乙醇或者碳酸锂除去苦味酸固定时产生的黄色。 4、升汞 单纯应用组织收缩明显，常与醋酸和铬盐配置成混合液。可以沉淀蛋白质（白、球蛋白），固定后用5%的碘酒脱汞，再用0.5%的硫代硫酸钠脱碘。 5、醋酸 低于15度为冰醋酸。穿透力强，不能保存糖和脂，固定染色体的混合固定液常含有醋酸。缺点是组织膨胀明显。 6、锇酸 强氧化剂不能与还原剂混合（乙醇和甲醛），常用1%-2%作为固定剂。为脂类固定剂，不使蛋白质产生沉淀。 7、丙酮 沉淀蛋白质，各种酶的固定。 8、三氯醋酸 沉淀蛋白质，是Susa主要成分，也是良好的脱钙剂。 不能使组织蛋白沉淀的单一固定液包括：甲醛、重铬酸钾（非酸化）、醋酸、锇酸（醋甲重锇）；对脂类固定无效包括：苦味酸、铬酸、升汞、醋酸。（苦