卵磷脂的制备及鉴定实验原理-黑龙江生物科技职业学院.pptVIP

实训六、卵磷脂的制备及鉴定 目的要求 原理 材料用具 试剂 操作方法 操作方法 操作方法 操作方法 操作方法 思考 题 * 黑龙江生物科技职业学院 生物制药技术 生物分离技术 主讲人：张爱华 实验原理 2 材料用具 3 操作方法 4 目的要求 2 1 5 5 注意事项 熟悉从蛋黄中制备卵磷脂的原理 掌握卵磷脂的制备基本操作及鉴定技术 卵磷脂及其他脂质可溶于乙醇被抽提，用丙酮从粗 卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质 和胆固醇分离开来。可利用金属盐沉淀剂将卵磷 脂从溶液中分离出来 。 用紫外分光光度计扫描其在90-400nm的 吸收光谱，可测得卵磷脂的紫外最大吸收峰。 卵磷脂紫外最大吸收峰在215nm波长。 新鲜鸡蛋、卵磷脂对照品、GF254硅胶板 离心机、旋转蒸发仪、布式漏斗、抽滤瓶、 真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计、 钳锅 （1）无水乙醇、95%乙醇、0.1%乙醇 （2）10%氯化锌溶液； （3）2%氯仿溶液； (4)丙酮(冰)； (5)甲醇； (6)碘 鸡蛋卵黄 2倍于卵黄体积的95％乙醇 混 合 搅 拌 离心机 3000r/min 15 min 沉淀物 提取3次 取上清液 1.粗提（一） 减压 蒸馏 (45℃) 至干 石油醚洗下 加 入 丙 酮 1.粗提（二） 粘壁的黄色油状物质 抽滤 分离出沉淀物 40℃真空干燥30min 2.精制 干燥的 卵磷脂 粗品 加相当于卵磷脂质量的 10％的氯化锌水溶液 约10% 乙醇 粗提液 加无水 乙醇 分离 沉淀物 室 温 搅 拌 0. 5h 加入冰丙酮 (4℃)洗涤 白色蜡 状的 精卵 磷脂 搅拌1h 用丙酮 复研洗 3.薄层色谱分析 卵磷脂 样品 卵磷脂 对照品 GF254硅胶板层析 GF254硅胶板层析 氯仿：甲醇：水 (65：25：4)展开 氯仿：甲醇：水 (65：25：4)展开 碘蒸气 显色 4.紫外吸收光谱测定 卵磷脂 样品 0.1％ 乙醇 溶液 溶于无水乙醇 紫外分光光度计扫描 90-400nm的 吸收光谱 测得卵磷脂的紫外最大吸收峰 注意事项 1.碘蒸气显色时，应保证层析干燥， 碘蒸气量不可过浓 2.紫外吸收光谱测定时样品与 对照品溶液浓度应相同 1．讨论影响卵磷脂得率的主要因素 。 2．根据紫外吸收光谱分析所制备的卵磷脂的纯度 。 *