低温肉制品中3种食源性致病菌多重聚合酶链式反应快速检测方法的建立.pdfVIP

奇主〉 201 7, Vo1. 31, No. 02 45 肉类研究 中国周~咽F晶蜡古唱开究中，也 CHINA MEAT RESEARCH CENTER MEAT RESEARCH 分析检测 低温肉制品中3 种食源性致病菌多重聚合酶 链式反应快速检测方法的建立主 李新福11 ，王周平1 ，李聪11 ，方怜俐l ，赵颖2 ，徐宝才ω，* (1.江南大学食品学院，江苏无锡 214122; 2，江苏雨润肉食品有限公司，肉品加工与质量控制国家重点实验室， 江苏南京 211806; 3，江苏省肉类生产与加工质量安全控制协同创新中心，江苏南京 210095) 摘 要:针对低温肉制品中较易污染的沙门氏菌 (Salmonella spp.) 、单增李斯特菌 (Listeria monocytogenes) 和 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 等有害微生物，利用多重聚合酶链式反应 (multiplex polymerase chain reaction , m-PCR) 的方法，对3 种菌同时快速检测，从而达到节省时间，提高效率的目的。使用沙门氏菌的invA基 因、金黄色葡萄球菌的PrfA基因和单增李斯特菌nuc基因设计3 对特异性引物，在确定特异性引物的基础上，将3 种 菌进行培养增菌后接种于低温肉制品中，过夜富集后收集并进行灵敏度检测，优化多重PCR反应体系并应用于实 际样品的检测。结果表明:多重PCR方法在同时检测这3 种有害微生物时， m-PCR最佳反应条件如下: 25μL反应 体系、 10XPCR缓冲液2.5μL、 2.5 mmoVL dNTPs 2.0μL、 2.5 U/μL的DNA聚合酶0.5μL及上、下游引物各0.5μL、 单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的模板1.0μL、沙门氏菌的模板2.0 件，加ddH 0补足至25μL，最佳退火温度为 2 64.C 。多重PCR快速检测方法适用于低温肉制品中沙门氏菌等3 种食源性致病菌的检测，具有快速、灵敏、特异、 简便等特点。 关键词:低温肉制品:多重PCR; 快速检测:食源性致病菌 Multiplex Polymerase Chain Reaction Assay for Rapid Detection of Three Foodbome Pathogens in Low-Temperature Meat Products 1 1 12 1 2 1 刀2 LI Xinfu 气 WANG Zhouping , LI Cong . , FANG Lingli , ZHAO Ying , XU Baωa矿i . .3 (1.School of Food Scαlenc臼e and Technology , Jiangnan University , Wuxi 214122 , China; 2.The State Key Laboratory ofMeat Processing and Quality C