木鳖子提取物通过调节MAPKs通路诱导黑色素瘤B16细胞分化的实验研究.pptVIP

 木鳖子提取物通过调节MAPKs通路 诱导黑色素瘤B16细胞分化的实验研究 河北医科大学第四医院 科研中心/肿瘤研究所 赵连梅 研究背景（一） 目前认为，肿瘤的形成同细胞分化异常有关，即肿瘤细胞不能进行正常分化，或是分化能力降低，从而导致肿瘤克隆的形成。进一步的研究发现，肿瘤细胞有可能在适当的刺激下被诱导分化，使之向正常细胞转变。 在特定药物作用下，恶性肿瘤细胞向正常细胞演变分化，表现为形态学、生物学和生物化学诸标志物方面向正常细胞接近，甚或转变为正常细胞，这种现象即称为肿瘤的诱导分化（differenation）或再分化、肿瘤逆转。这些能够诱导肿瘤细胞逆转的化学物质称为分化诱导剂。 “诱导分化”概念的提出，为肿瘤治疗提供了一个新的治疗途径。它是针对肿瘤细胞特异性杀伤，而不损伤正常人体组织细胞的药物，也是肿瘤治疗方面一个较好的，具有潜力的方向。 肿瘤的分化治疗 黑色素瘤（melanoma） Treatment-resistant Median survival :6-9month Normal chemotherapy protocol new drugs or novel therapy Information is limited Early invasion and metastasis Differentiation inducer 研究背景（二） 黑色素瘤细胞是研究肿瘤细胞分化的理想模型 Add your title in here 黑色素瘤细胞向正常细胞分化后，出现典型的树突状突起结构，黑色素生成及酪氨酸酶活性增加。 tyrosinase activity Dendrite-like outgrowth Melanin production find out the agent that induce melanoma cell differentiation from plants （图片来自文献） 中药木鳖子 本实验将探讨中药木鳖子提取物对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用及其相关机制 主产：广西、四川、 湖北。主治：消肿散结，祛毒。 　　治痈肿、疔疮、痔疮、无名肿毒 。 多在治疗肿瘤的方剂中出现，但是文献中并未见木鳖子提取物抗肿瘤的研究报道。 实验路线和方法： 活性成分提取 乙醇浸泡7天,加热回流提取2次 旋转蒸发仪 冷冻浓缩成浸膏 萃取 乙酸乙酯 ( 石油醚 ) 正丁醇 乙醚 水相 木鳖子 MTT法、形态学检测筛选出具有生物活性的液相 大孔树脂 硅胶柱层析 筛选出活性 单体化合物 阳性对照：α-MSH B16 cells 细胞增殖抑制和集落形成率 木鳖子 活性成分 细胞活性 检测 细胞功能 形态观察 黑色素\酪氨酸酶\ 细胞转移侵袭能力检测 P38\ERK\JNK基因水平表达变化 特异性通路抑制剂SB203580(P38）、PD98059(MEK)对药物诱导分化的影响 P38\ERK\JNK蛋白水平及活性（磷酸化水平）的变化 选择活性改变显著的通路 检测该通路下游基因及蛋白表达的变化 MAPKs通路上游PKA、PKC活性的变化 Giemsa染色/超微结构观察/荧光染色（AlexaFluor488 phalloidin) Compare with Control, P0.01, **P0.001 Table 1 Inhibitory effect of CMSEE on melanoma B16 cells 1 2 3 4 Fig.1 Effect of CMSEE on the clone forming of B16 cells A: The representative picture of clone forming(×200). 1.Control；2.CMSEE (10mg/L)；3.CMSEE (20 mg/L);4.CMSEE(40mg/L) B: Clones counting.Compare with control group, *P0.05,**P0.01 A B CMSEE对B16细胞增殖活性及克隆形成率的影响 The cell viability and modality of B16 cells after treatment by CMSEE(×200). Morphological changes of B16 cells observed under the microscope. 1: untreated cell; 2: CMSEE (20mg