薄层板的铺制活化点板展层显色及Rf的计算.docVIP

实验项目一 1、实验项目名称： 薄层板的铺制、活化、点板、展层、显色及Rf的计算。 2、实验项目性质： 验证性。 3、实验要求： 必修。 4、计划学时数： 6学时。 5、实验内容： （1）硅胶薄层板的铺制 薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中, 在密闭的层析缸中展开，使混合物得以分离的方法。由于层析在薄层上进行故而得名。　　 薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。 先做一下准备工作：玻板（约10×6cm） CMC-Na)溶液 配成0.5%溶液，CMC-Na一般是要煮的，煮的时候应该缓缓加入CMC-Na，否则容易结成团块，影响浓度；煮好后一般放个两三天后，取上层清液使用，如果急着使用，也可以用过滤的方法。 硅胶H（小于260目） 硅胶：CMC-Na=1g：3mL 研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。 铺好的板，用手捏起来，平着一放，摔一摔，让玻板上的硅胶铺得更均匀。 （2）硅胶薄层板的活化 铺好的硅胶板，放置过夜，就可使用，想活化的也可活化。即移入烘箱，缓慢升温至105-110℃恒温活化半小时，取出放入干燥器中备用。 （3）硅胶薄层板的展层 用点样毛细管取少量溶液点于硅胶板（离板底部大约0.5cm ）。将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点2-3mm为宜（切勿将样点侵入展开剂中），密封顶盖，待展开至溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干。 （4）硅胶薄层板的显色及Rf的计算 分离的化合物若有颜色，很容易识别出来各个样点。但多数情况下化合物没有颜色，要识别样点，必须使样点显色。通用的显色方法有显色剂显色（碘蒸气显色）、紫外线显色和荧光薄层板显色和硫酸-乙醇溶液显色。 碘蒸气显色：将展开的薄层板挥发干展开剂后，放在盛有碘晶体的封闭容器中，升华产生的碘蒸气能与有机物分子形成有色的缔合物，完成显色。 紫外线显色：用掺有荧光剂的固定相材料（如硅胶F，氧化铝F等）制板，展开后在用紫外线照射展开的干燥薄层板，板上的有机物会吸收紫外线，在板上出现相应的色点，可以被观察到。 荧光薄层板检测：荧光薄层是在硅胶中掺入少量荧光物质制成的板，在254nm紫外灯，整个薄层板显黄绿色荧光，被测物质由余吸收了部分照射在此斑点位置的紫外线，而呈现各种颜色。 硫酸乙醇溶液显色剂：用乙醇-硫酸液显色时，配制方法为把10ml浓硫酸加入在90ml乙醇中。注意要少量地慢慢混合。均匀喷在薄层板上，然后通过加热，不同的化合物则显示不同的颜色。 比移值Rf的计算： Rf =原点至组分点中心的距离/原点至流动前沿的距离 组分1的Rf =d1/d 组分2的Rf =d2/d 柱层析条件的选择：以薄层层析第一个点的Rf为0.3左右的展开系统为柱层析的洗脱条件。 6、项目需用仪器设备名称： 涂布器、层析缸、紫外灯、喷雾器、加热烤板。 7、所需主要元器件及耗材： 薄层层析硅胶、柱层析硅胶、层析柱、层析缸、点样毛细管、硫酸、乙醇。 8、实验项目目的和任务： 掌握薄层板的铺制、活化以及点样技术，掌握利用薄层层析筛选柱层析条件，熟悉薄层层析的原理、显色原理等。 思考题： 1. 吸附层折的基本原理是什么？ . 展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？