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第五章 电泳分析技术
* 一、常用电泳设备的基本结构 (一)电泳电源 (二)电泳槽 (三)附加装置 06-08 平卧式电泳槽装置示意图 二、电泳仪的主要技术指标 1. 输出电压 8. 连续工作时间 2. 输出电流 9. 保护措施 3. 输出功率 10. 显示方式 4. 电压稳定度 11. 定时方式 5. 电流稳定度 12. 电源电压 6. 功率稳定度 13. 电源频率 7. 输出组数 14. 功耗 一、毛细管电泳的相关概念 1. 电场强度 (Electric Field Strength) 2. 电泳淌度 ( Electrophoretic Mobility) 3. 迁移时间 (Migration Time) 4. 电泳速度 ( Electrophoretic Velocity) 5. 电渗流 (Electroosmotic Flow,EOF) 6. 焦耳热 (Joule Heating) 二、毛细管电泳的基本工作原理 溶液中的带电粒子以高压电场为驱动力,沿毛细管通道,以不同速度向与其所带电荷相反的电极方向迁移,并依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异 而实现分离。 06-09 毛细管电泳仪装置示意图 三、毛细管电泳的特点 1. 高灵敏度 2. 高速度 3. 高分辨率 4. 样品少 5. 自动化程度高 6. 应用范围广 06-10 英特雷勃 ——全自动电泳仪 四、毛细管电泳的分离模式 (一)毛细管区带电泳 它是通过在充满电解质溶液的毛细管中,不同质荷比大小的组分在电场的作用下,依迁移速度的不同而进行分离的。根据组分的迁移时间 进行定性,根据电泳峰 的峰面积或峰高进行定 量分析。 06-11 毛细血管区带电泳原理图 (二)毛细管凝胶电泳 将板上的凝胶移到毛细管中作支持物进行的电泳。 凝胶具有多孔性,起类似分子筛的作用,能根据待测组分的质荷比和分子体积的不同而进行分离。 适用于分离、测定肽类、蛋白质、DNA类物质的分离。 (三)毛细管胶束电动色谱(MECC) 使MECC系统中存在两个相:流动的水相和起到固定相作用的胶束相。在含有胶束的流动相中,溶质在“水相”和“胶束相”(准固定相)之间进行分配,即使是中性溶质,因其本身疏水性不同,在二者之间的分 配也会有差异,疏水性强的溶质在“胶束相”中停留时间长,迁移速度就慢。反之,亲水性强的溶质迁移速度就快,最终中性溶质将依其疏水性不同而得以分离。 06-12毛细管胶束电动色谱原理图 (四)毛细管等电聚焦电泳 不同等电点的分子分别聚集在不同的位置上,不作迁移而彼此分离,这就是等电聚焦分离过程。毛细管的等电聚焦是在毛细管内实现的等电聚焦过程,具有极高的分辨率,通常可以分离等电点差异小于 0.01pH单位的两种蛋白质,例如肽类、蛋白质的分离。 (五)毛细管等速电泳 毛细管内首先导入具有比被分离各组分高电泳淌度的前导电解质,然后进样,随后再导入比各分离组份低电泳淌度的尾随电解质,在强电场的作用下,各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中发生分离。 (六)毛细管电色谱 它包含了电泳和色谱两种机制,是在毛细管中填充 或在毛细管壁 上键合(或涂壁)固 定相,从而构成毛细 管色谱柱,依靠电渗 流推动流动相,携带 样品迁移,根据样品 分子的质荷比、分子 尺寸及分配系数的差 别而分离。 06-13 CEC-加压毛细管电色谱仪 五、毛细管电泳仪的基本结构 毛细管电泳仪的结构并不复杂,主要有高压源、毛细管柱、检测器,以及两 个供毛细管两端插入而又可 和电源相连的缓冲液槽。 (一)毛细管柱 (二)检测器 (三)毛细管电泳 法的进样技术 06-14毛细管电泳仪 六、常用各种电泳仪简介 (一)稳压稳流电泳仪 稳压稳流电泳仪是中压电泳仪。其输出电压的调节范围为0V~600V、输出电流为0mA~100mA。该机工作稳定性好、调节范围宽,并设有完善的短路保护电路和过流保护电路,是目前国内中
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