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生物技术在兰花上的应用进展 摘要 兰花是非常珍贵的观赏性花卉，由于兰花在自然状态下种子萌发率非常低，繁殖很困难，但是传统的栽培法(分株繁殖)，繁殖周期太长，繁殖率低下。另外，由于长期的无性繁殖，造成带病毒的植株日益增多，使兰花的优良品质下降。生物技术在兰花的快速繁殖、品种的复壮、优良品种的培育等方面具有重要的作用，利用这些技术进行大规模的兰花工业化生产取得了巨大的经济效益，目前已在世界范围内形成了高效益、大规模的兰花产业。本文对兰花产业中生物技术的应用进行了综述。并对生物技术在兰花产业中的应用前景进行了展望。 关键词 非共生萌发技术、组培快繁技术、基因工程技术、细胞工程技术。 兰花是整个兰科植物的总称，它是显花植物中最大科之一,全世界约有800个属，2 5000 个种，分布于全球各地，大多数种类分布在热带、亚热带地区。我国野生兰花约有173 个属，1 240 个种，在南北各地均有分布，但以云南、台湾、海南最为丰富(范成明等, 2003)。国兰花小香浓,常见的有:春兰、蕙兰、建兰、寒兰、墨兰。洋兰花大色艳,但无香味,具有极高的观赏价值和经济价值,常见的有:卡特兰、兜兰、石斛、蝴蝶兰、文心兰、万代兰等。在我国,国兰已被尊为一种兰文化，它花色素雅、高洁，有“花中君子”之称。近年来,我国沿海地区从国外大量引进洋兰栽培,而国兰也是我国花卉业出口创汇的重要品种,市场对兰花的需求量越来越大。此外还有作为药用的天麻、白芨、红门兰等和作为香料的香籽兰等，有极高的经济价值。具有观赏和药用价值的兰科植物目前在国际、国内市场上占有重要地位。由于兰科植物在自然状态下繁殖困难，种子萌发率非常低，故传统栽培靠分株繁殖，繁殖周期长，繁殖率低，育种进程十分缓慢。另外，由于长期无性繁殖，造成带病毒的植株日益增多，使兰花的优良品质下降。因此，兰花的生物技术格外引人注目。 自20 世纪60 年代以来, 生物技术的应用促进了兰花组织培养的研究, 进而在兰花细胞工程、基因工程等生物技术的研究方面取得了重要进展, 并在全世界范围内形成了高效益、大规模的兰花产业。 1 非共生萌发技术 目前, 兰花优良品种的获得主要以有性繁殖方式获得种苗。因此, 种子离体萌发技术的研究显得尤为重要。兰花种子体小量多, 绝大多数种类的种子不具子叶和胚乳, 在自然条件下, 需和真菌共生才能萌发。在实验和生产实践中, 可模仿自然和真菌共生培养, 但需先分离出相应的真菌, 且分离程序繁杂,目前已较少使用。替而代之的是非共生萌发法, 或称无菌播种。随着兰花工业的发展, 兰花属间和种间杂种大量出现, 研究者们设计了上百种种子无菌萌发培养基, 并成功地在蝴蝶兰、文心兰、大花蕙兰、石斛兰及中国兰中的春兰、墨兰等产业化中推广应用, 基本形成了一套比较成熟的技术体系。 2 组培快繁技术 兰花的组织培养始于20 世纪60 年代。之后40 多年来, 兰花组培技术不断地发展和完善, 先后大约有60 余属数百种兰花可用组培方法进行繁殖, 且其产业化应用的成熟度已超过了其他花卉。但受基因型和外植体取材部位方式的影响, 诸多文献发表的组织培养方法及配方多因无法重现而被疑为不实。同时, 受商业利益的驱动, 有关企业化栽培的知识与经验, 多年来亦被视为不传之秘。茎尖是最早也是最常用的用于兰花快速繁殖的外植体。目前推向产业化的大花蕙兰、卡特兰、石斛兰、蝴蝶兰、文心兰等首先在茎尖培养中取得成功。中国兰的茎尖培养, 也先后在建兰、春兰、墨兰等几十个品种中获得成功。除茎尖, 侧芽应用也相当广泛。虽然顶芽和侧芽是极好的高质量外植体, 但芽的来源有限。根据细胞全能性的观点, 人们在更大范围内寻找了更多适宜的外植体, 如试管苗的幼叶、根顶端分生区、花梗、子房等。这些研究工作的成功, 减轻了对兰花母株的伤害, 起到了对珍稀品种的挽救和保护作用。 ３ 基因工程技术 兰花基因工程技术的研究是近年才起步的, 主要因为兰科植物对根癌农杆菌或发根农杆菌不敏感, 缺乏合适的载体, 所以基因工程起步较晚, 进展缓慢。事实上, 从兰花产业的发展看, 将外源基因导入兰花的应用要求是迫切的。目前, 国际上最具商业价值的几个大属的兰花, 存在着病虫害严重、栽培和养护环境苛刻、成花周期长、开花控制难度大、花色花形不丰富等普遍问题。兰花产业的发展迫切要求采用现代生物技术手段, 对品种进行遗传改良。从技术体系上看, 兰花转基因技术研究和开发的关键条件和时机已经成熟。首先, 兰花基因转化的受体系统构建技术日益成熟。一个优良基因转化受体系统, 要求植物材料有高效稳定的再生能力和大量稳定的外植体来源, 并且对选择性抗生素和农杆菌侵染有一定的敏感性。从目前研究看来, 这些条件基本具备。理论和实践都反复证明, 体胚、原球茎、类原球茎都是兰花基因转化的理想受体。40 多年