蛋白质组学试卷.docVIP

题号 一 二 三 四 五 六 七 八 总成绩 得分 得分 一、名词解释（共30分，每小题5分） 1. 基因网络的鲁棒性 答：基因网络鲁棒性是指在受到外部扰动或内部参数摄动等不确定因素干扰时，生物系统内的基因网络保持其结构和功能稳定的一种特性。产生生物鲁棒性的作用机制主要是生物系统的反馈、冗余、模块和结构稳定等。 2. 二维凝胶电泳技术 答：二维凝胶电泳技术是研究蛋白质组学的有效分离鉴定技术之一。有两部分组成：第一相，等电聚焦，根据蛋白质电荷差异。第二相，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据蛋白质分子量差异。这种分离技术是利用蛋白质的等电点和分子量，结合凝胶化学特性，分离各种蛋白的方法。第一项在高压电场下对蛋白质进行等电聚焦，再在第一项垂直方向上进行第二相SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后通过考马斯亮蓝染色，查找分离开的蛋白质位置。 3. KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) 答：KEGG(京都基因与基因组百科全书)是基因组破译方面的数据库让计算机利用基因信息对更高层次和更复杂细胞活动和生物体行为作出计算推测。为达到此目的，人们建立了一个在相关知识基础上的网络推测计算工具。在给出染色体中一套完整的基因的情况下，它可以对蛋白质交互（互动）网络在各种细胞活动起的作用作出预测。Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry 答：基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱。仪器主要由两部分组成：基质附助激光解吸电离离子源（MALDI）和飞行时间质量分析器（TOF）。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比 ，检测离子。 得分 二、简答题（共40分，每小题10分） 1. 简单叙述BlueNative的实验原理。 答：BlueNative是为了研究线粒体中的多亚基蛋白质复合物的建立的一种非线性电泳。该技术在分离蛋白质复合物的时候能够保持其生物活性。是使用温和的非离子型表面活性剂蛋白质复合物与脂分离，考马斯亮蓝G-250利用其疏水的特性同蛋白质复合物结合，使复合物表面区域丧失疏水特性二呈现水溶性，同时复合物表面足够多的负电荷使其能够在电泳中向阳极涌动，此外，表面的负电荷使得膜蛋白之间聚集的能力被显著减弱并降低了被表面活性剂变性的危险，BN电泳之后，可以将所需的泳道切下来，转移到第二向常规SDS上分离复合物的组成部分。还可以将感兴趣的条带切下来，电泳脱其中的复合物然后进行双向电泳。在蛋白质组学研究中BN已经得到成功的应用，特别是它能够同时比较不同生理时期的多种蛋白质复合物，但是需要注意的是，在研究相互作用的时候，需要同它的多种技术，如酵母双杂交，免疫共沉淀等综合使用，才能避免其中的一些假象。 2. X-ray解析蛋白质晶体结构的步骤是什么？其中的关键是哪一步，为什么？ 答：X-ray解析蛋白质晶体结构的步骤： 1. 得到生物大分子晶体。 2. 收集和处理衍射数据。 3. 确定相位，最后进行结构修订。 X 光衍射结晶法当中很重要的一个条件就是样品的制备，若是不可结晶，则铁定不能进行X 光衍射。蛋白质要结晶,首先必须要先大量制备我们所要结晶的蛋白质,因此会里用载体将记载蛋白质序列的核酸输入到生产蛋白质的菌体中,如此便可大量制造出纯度高的蛋白质,而后气相扩散法将此蛋白质结晶出来. 3. 简述过氧化物同工酶电泳技术的原理，该技术在生物技术和食品领域有哪些具体应用？ 答：同工酶是指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。分离过氧化物酶同工酶，根据酶的生物化学反应，通过染色方法显示出酶的不同区带，以鉴定过氧化物酶同工酶。测定同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具。典型的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列， 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游， 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用， 启动它所调节的基因的转录。免疫共沉淀（Co-Immunoprecipi