强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱纯化血清中免疫球蛋白和白蛋白.pdfVIP

2012年8月 Vol.30 No.8 August 2012 ChineseJournal of Chromatography 851~855 技术与应用 DOI:10.3724/ SP.J.1123.2012.04002 强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱纯化血清中 免疫球蛋白和白蛋白 秦宗华,　 陈　 婷,　 李任强∗ (暨南大学生物工程学系广东省分子免疫与抗体工程重点实验室,广东 广州510632) 摘要:动物血清中免疫球蛋白和白蛋白的等电点分别约为7．8和4．8,根据它们等电点的较大差别,利用Q Sepha- TM rose -XL强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱同时分离纯化这2种蛋白。 以0．02 mol/ L pH 8．0 的Tris-HCl缓 冲液平衡离子交换色谱柱并将已稀释 10 倍的高免疫的兔血清上样,采用 pH 分段洗脱。 在 pH 6．0 时以0．3 mL/ min低流速洗脱得到高纯度的免疫球蛋白,继续在pH4．0 时洗脱,再辅以Sephadex G-75分子排阻色谱可获 得纯度大于95% 的白蛋白。 对纯化后的蛋白进行活性检测,证明所纯化的免疫球蛋白和白蛋白都保持正常的生物 活性。 蛋白质含量测定说明免疫球蛋白的纯化回收率达到95% 以上,而白蛋白的纯化回收率大于90%。 该法简便 快速,可同时从动物血清中纯化出保持生物活性的免疫球蛋白和白蛋白,纯化效率高。 关键词:阴离子交换色谱;分子排阻色谱;免疫球蛋白;白蛋白;动物血清;纯化 中图分类号:O658　 　 　 文献标识码:A　 　 　 文章编号:1000-8713(2012)08-0851-05 Purification of immunoglobulin and serum albumin from serum via strong anion exchange chromatography coupled with molecular exclusion chromatography QIN Zonghua,CHEN Ting,LI Renqiang∗ (Departmentof Biotechnology,Jinan University,Guangdong ProvinceKeyLaboratory of Molecular Immunology andAntibodyEngineering,Guangzhou510632,China) Abstract:The isoelectric points of immunoglobulin (Ig) and serum albumin (SA) in animal serum are about 7．8 and 4．8, respectively. Based on their larger difference of isoelectric TM points, Q Sepharose -XL strong anion exchange chromatography coupled with molecular exclusion chromatography was used to purify Ig and SA simultaneously from the high immune TM rabbit serum. After the Q Sepharose -XL strong anion exchan