氨基酸的分离与分析试验教学设计-北京科技大学.pdfVIP

中国电力教育 2009年8月下 总第43期  实践实验教学 “氨基酸的分离与分析”实验教学设计 钟广蓉 时国庆 王海鸥 尹春华 邱丽娜 摘要：采用高效液相色谱柱前衍生法取代原有的纸层析法，对生物化学实验中氨基酸的分离检测实验进行了重新设计，使实验教学 内容信息量更加丰富，更适应生产与科研需求，从而提高了学生的学习兴趣，促进了创新能力的培养。 关健词：生物化学实验；氨基酸；高效液相色谱；实验教学设计 作者简介：钟广蓉（1973-），女，湖南长沙人，北京科技大学应用学院，工程师，北京科技大学生物化工硕士研究生，主要研究方 向：环境生物化学检测。（北京 100083） 生物化学及生物化学实验是生物专业本科生的重要基础 的作用是将浓度的变化变成电信号。常用紫外/ 可见检测器， 课，其教学效果直接影响到学生对后续课程的学习。为提高学 195～350nm的可变波长检测器通常使用氘灯。 生学习本课程的积极性，调动学生的学习兴趣是根本。近年来， 2.高效液相色谱的分离原理 我们积极探索将实验教学内容与生产和科研实践相结合，引导 HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配 学生思考生产与科研实践中遇到的相关问题，从而调动了学生 系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的 [5] 的学习兴趣。以“氨基酸的分离与分析”实验为例，此前我们 过程。 [1] 采用的实验教材是利用滤纸层析法分离鉴定氨基酸， 该法操作 通常，按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可 繁锁，耗时长，目前在实际工作中已很少采用。并且，由于学生 以作如下的分类：正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性； 在化学实验中已学习了薄层与纸层析分离技术，学生对此实验 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性；亲和色谱；疏水色谱； 的积极性不高。目前，生产与科研活动中对于样品中的氨基酸 离子交换色谱；凝胶色谱（体积排阻色谱）等。详细介绍可参见 通常采用高效液相色谱分析方法，一般需经过衍生化、色谱柱 有关仪器分析教材或专著。 分离、分析检测三个步骤。为此，我们对“氨基酸的分离与分析” 本试验所用色谱为反相色谱，色谱固定相是被称为“万 这部分教学内容进行了改革，采用2，4—二硝基氟苯 DNFB 柱 能”固定相的“C18”，即十八烷基硅烷键合硅胶固定相 [2，3] 前衍生高效液相层析法分离测定氨基酸， 现对相关教学内容 （Octadecylsilyl，简称 ODS）。这种固定相在反相色谱中发挥 介绍如下： 着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱 70～80%的分析 一、教学目标 任务。由于C18（ODS）是长链烷基键合相，有较高的碳含量 学习氨基酸 2，4—二硝基氟苯 DNFB 柱前衍生法的原理 和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力， 与氨基酸的定性定量测定方法；了解高效液相色谱仪的基本结 因此在生物化学分析工作中应用最为广泛。 构及高效液相色谱法分离的原理；学习高效液相色谱仪及色谱 反相色谱中，溶质按其疏水性大小进行分离，极性越大疏 工作站的使用方法。