使用成像细胞分析仪悬浮细胞进行细胞凋亡分析.PDFVIP

GE Healthcare Life Sciences Application Note IN Cell Analyzer 1000 使用成像细胞分析仪对悬浮细胞进行 细胞凋亡分析 关键词：◎悬浮细胞 ◎Imaging Cytometer成像细胞分析仪 ◎细胞凋亡 ◎IN Cell Analyzer 前言 成像细胞分析仪对细胞成像，根据每个细胞的图像获得荧 本文举例说明使用成像细胞分析仪IN Cell A nalyzer 1000 光强度、面积、长度、圆度等形态信息及蛋白质的定位信 对悬浮细胞进行细胞凋亡分析。以前多使用流式细胞仪分 息。无论贴壁细胞还是组织切片，检测时都不需要进行剥 析细胞凋亡。成像细胞分析仪不仅能够进行群体分析，而 离、分散这样的操作。根据图像所提供的信息，能够像传 且能够结合细胞核片断化等形态变化进行检测。另外，对 统流式细胞仪那样进行群体分析。因为每个细胞的图像与 于难以对焦并获得其均匀图像的悬浮细胞，通过离心，也 参数值是相互关联的，所以如果需要，还可以对群体分析 能进行分析。 中具有特定数值特征的的细胞进行形态观察和数值确认。 （图１）。 图1 细胞数据与细胞图像的关联 散点图①、数据②、细胞图像③相互关联，点击任何一个，其他两个会突出显示。 71-3282-11 使用的产品 3. 舍弃上清液，100 μl 1 ×Annexin缓冲液重悬细胞。 •IN Cell Analyzer 1000 ，用于获取细胞图像 4. 添加15 μl Alexa Fluor 488-Anxexin V ，2 μl PI工作液、 20 μl 600 ×Hoechst 33342溶液和80 μl 1 ×Annexin缓 •IN Cell Investigator Software ，图像分析软件 冲液，常温下孵育15分钟。 5. 400 ×g离心5分钟，舍弃上清液，100 μl 1 ×Annexin缓 样品及试剂 冲液重悬细胞。 •Jurkat 细胞 6. 细胞转移到96孔板中，短暂离心使细胞沉降到孔的底 •喜树碱：细胞凋亡诱导剂 部，用IN Cell Analyzer 1000进行观察和检测。 •Vy brant A poptosis Assay Kit # 2 ：A lexa Fluor 488标记 AnnexinV ，PI （Invit rogen V 1324 1） 结果 •Hoechst 33342 （Doj indo 346-07951） ※A nnexin V 、PI是细胞凋亡阶段标志。A nnexin V将细胞凋亡早期以后 10 μM喜树碱处理过的细胞用IN Cell Analyzer 1000拍照， 的细胞全部染色。PI对死亡细胞的的细胞核染色，细胞凋亡晚期以后的 拍摄的图像如图2 、3所示。图3显示了用图像分析软件IN 细胞核都会被PI染色。Hoechst 3334 2可以将所有细胞核染色，无论活 Cell I