单双波长在生物活性测定中比较探究.doc

单双波长在生物活性测定中比较探究[摘要] 目的:通过比较研究,确定酶标仪单双波长哪个更适于生物制品活性测定实验。方法:样品通过多次实验单双波长扫描,比较得到的实验结果,进行统计分析。结果:选用双波长可以排除其他因素对结果的影响,实验结果的标准差和离散系数均较低。结论:单双波长法更适于生物活性测定实验,提高结果的准确度。 [关键词] 酶标仪;单波长;双波长 [中图分类号] R927.2[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)04(b)-052-02 The contrast research on single and dual wavelength detection about bioactivity ZHAO Hong (Beijing SL Pharmaceutical Co., Ltd., Beijing 100041, China) [Abstract] Objective: To choose a suitble method of bioactivity detection by making a contrast research, either microplate reader single wavelength or dual wavelength. Methods: Make many experiments of single wavelength and dual wavelength, compared all results, then analyzed statistically. Results: Choose dual wavelength detection, suitable for bioactivity detection, less SD and CV%. Conclusion: Single and dual wavelength are more accuracy and reduce interference factors. [Key words] Microplate reader; Single wavelength; Dual wavelength 生物制品活性测定实验大多用MTT法,使用酶标仪扫描比色,通过数据分析得出实验结果。一般酶标仪有单波长和双波长两种测定模式[1-2],而且采用的都是垂直光路。选择单波长测定就是选择测定波长[3],直接测定样本的吸光度。而双波长测定时采用不同的波长,即测定波长(主波长)和参比波长(次波长)同时测定样品的吸光度,以清除一些外在影响因素,提高测定结果的精密度和准确度。但鉴于日常工作关于单双波长对于实验结果的影响程度不是很了解,因此想通过此次比较实验了解单双波长对生物活性测定实验结果影响的大小以及单双波长哪个更适合于生物活性测定实验。 1 仪器与试药 1.1 仪器 Emax酶标仪(美国分子仪器公司);单道移液器[1 ml(Gilson)、200 μl(Gilson)、20 μl(Gilson)];8道移液器(Finnpipette)。 1.2 试药 本公司生产的IL-11成品(批号600 U IU/支);IL-11原液(批号4.563 mg/ml)。 2 方法与结果 2.1 MTT比色法 B9-11细胞常规培养,实验时离心收集对数生长期的细胞,以10%新生牛血清的RPMI 1640培养基调整细胞数为2×105个/ml,每孔加入50 μl细胞悬液,再加入50 μl待测的样品(空白对照孔加50 μl培养基),在37℃、5% CO2条件下培养72 h后,每孔加入5 mg/ml的MTT溶液10 μl,继续培养4 h,而后加入MDF裂解液100 μl,37℃孵育过夜,酶标仪扫描570 nm或570 nm+630 nm测定OD值,使用软件SOFTmax PRO 3.1分析得出实验结果。 2.2 单双波长测定结果比较 本公司生产的IL-11成品(批号600 U IU/支)和IL-11原液(批号4.563 mg/ml)的单波长570 nm和双波长570 nm+630 nm测定结果的比较[1],见表1、2。 由表1、2可知,成品和原液相应的单波长和双波长测定结果相接近,单波长测定结果的标准方差和CV(%)明显高于双波长。 2.3 IL-11成品单双波长各扫描两次测定结果的稳定性比较[4] 见表3。 由表3可知,单波长两次测定结果比双波长两次测定结果差异大,双波长测定两次的结果重复性好于单波长。 2.4 IL-11