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iTRAQ技术介绍 一、阐述 1.1 “iTRAQ”同位素标记相对和绝对定量技术 由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)开发的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法。 iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素(isobaric)。在质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。而在串联质谱中，信号离子表现为不同质荷比(114～117)的峰，因此，根据波峰的高度及面积，可以得到蛋白质的定量信息。 虽然DIGE和ICAT已经广泛应用于蛋白质研究，但是iTRAQ作为一种新的蛋白质绝对和相对定量技术，具有很好的精确性和重复性，并且弥补了DIGE及ICAT的不足。 1.2 分析目标 寻找差异表达蛋白，分析蛋白功能并构建蛋白相互作用网络。 二、项目实验方案 2.1 检测分析平台 QSTAR 质谱仪(ABI 公司) 蛋白分离鉴定时保证谱图的质量，肽段峰具有较好的分离，并具有较高的信号强度。为保证机器状态，BSA标准样品10 fmol半峰宽0.1min左右，信号强度不低于103 counts。 2.2 实验流程