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卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的应用 【摘要】? 目的? 探讨卡式微柱凝胶法在临床血型鉴定中的应用。方法? 对例病人同时采用卡式微柱凝胶法与传统手工操作法进行血型鉴定。结果? 卡式微柱凝胶法正确率为100%，手工正定型法为98%，正定型+反定型为100%；但在操作标准化、灵敏度、特异性、客观性等方面，卡式微柱凝胶法具有明显优势。结论? 卡式微柱凝胶法对提高血型鉴定的检验质量与水平有明显的促进作用。 血型鉴定在急诊抢救、手术治疗、贫血治疗、刑事鉴定等过程中是不可缺少的检验，它的正确与否关系到病人生命安危。目前国内各级医院血型鉴定绝大多数都是手工操作，而且在一般情况下仅做正向定型法。由于手工操作不易标准化，且干扰因素较多，血型错检时有发生。因此，为了确保血型的准确性，实行血型鉴定的标准化，我科血库于20年月开始采用卡式检测法（微柱凝胶试验）来进行血型鉴定，并对例住院病人进行卡式微柱凝胶法与手工操作平行实验，实验结果进行比较，现报道如下。 　　1? 材料与方法 　　1.1? 仪器? 孵育器：专用孵育器；离心机：专用离心机；移液器：1μl、50μl、50μl和1000μl。 　　1.2? 试剂　　1.2.1? 仪器试剂? 　　1.2.2? 手工试剂? 抗A、抗B血清为生产，生产批号，单克隆抗D为Serologicals Ltd 公司生产，生产批号BMJ0405G,均由市中心血站提供。 　　1.3? 标本来源? 我院2003年10月下旬新入院患者486例，其中男性235例，女性251例，年龄2天~87岁，平均年龄22.3岁。抽取病人静脉血0.5ml，肝素抗凝，同时分别进行手工操作与卡式检测法血型鉴定。 　　1.4? 方法 　　1.4.1? 卡式检测法按Diana卡式血型鉴定操作手册进行： 　　1.4.1.1? 取Diana Gel ABO/Rh血型鉴定卡一个，标记病人姓名，病历号等，在空白位置写上抗A、抗B、抗D标准血清，撕去卡上部的锡纸膜。 　　1.4.1.2? 在A、B、D孔分别加入25μl抗A、抗B、抗D标准血清。 　　1.4.1.3? 在A、B、D孔分别加入已配制的2%病人红细胞悬液25μl。 　　1.4.1.4? 孵育15分钟。 　　1.4.1.5? 离心。 　　1.4.1.6? 按说明书提示标准判读结果。 　　1.4.2? 手工操作按《全国临床检验操作规程》［1］规定正向定型及正向定型+反向定型试管法进行。 　　2? 结果 　　将上述两种方法的鉴定结果进行比较，凡正反定型以及卡式检测法所测血型不符合者，将血液红细胞用生理盐水洗涤3次，再用两种方法重复测定，统计出正确百分率。见表1。 　　表1? 两种方法血型鉴定结果正确率比较（略） 　　3? 讨论 　　《全国临床检验操作规程》［1］对血型鉴定要求同时通过正、反向定型来准确鉴定ABO血型，并规定操作中红细胞悬液的浓度、加样的顺序、试剂用量、离心速度、时间等。但目前国内大多数医院血型鉴定均只采用正向定型法，省略了反向定型，且操作较随意，难以标准化，故易导致血型错检的发生。 　　卡式检测法（微柱凝胶试验）是法国Dr.Yves Lapierre在1986年首先发明的一项免疫学检测新技术，是微柱凝胶技术与以往所有血型鉴定技术相结合的产物。1994年此项技术获得了美国FDA的认可。经过不断改进和临床大量应用，目前，在多数发达国家，此项技术已作为常规的红细胞血型血清学检测技术应用于临床［2-5］。 　　卡式检测法是抗原抗体反应与凝胶分子筛技术相结合的产物。通过调节葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小，使分子筛只允许游离分子通过，从而达到分离凝集红细胞和游离红细胞的目的。即将红细胞和血清加在凝胶的上部反应离心以后，凝集红细胞将受到凝胶的阻碍而停留在凝胶的上部或凝胶中，则证明发生凝集反应为阳性，反之，所有红细胞都停留在凝胶底部，证明未发生凝集反应，则可判为凝集反应阴性。 　　3.1? 敏感性方面? 新生儿及部分老年人RBC抗原较青壮年弱，一些白血病或恶性肿瘤也会使RBC抗原变弱，在手工操作鉴定时，凝集较弱难以判别血型。而卡式检测法，分离柱中的凝胶孔隙大小只让未凝集的RBC通过，而凝集的RBC则被阻碍于分离柱外，使检测具有较高的灵敏性，尤其在检测具有重要临床意义的红细胞抗体时，如抗-E，有更高的敏感性，其结果的阳性度更强［6-8］。 　　3.2? 特异性方面? 某些自身免疫性疾病或新生儿溶血病患者的RBC会自发的发生凝集，另外，如果RBC膜有遗传性或获得性异常，也易发生凝集，在人工血型正定型中，出现假凝集易造成血型错检。卡式法中加入了抗人球蛋白，以促进红细胞的特异性凝集，因此，特异性高于手工正定型法。 　　正反定型相结合虽然弥补了正定型的不足，正确率达到了100%，但在标准化操作等方面同卡式检测法