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血液中脂溶性维生素的检测 仪器与试剂 HP1220高效液相色谱仪、氮吹仪、漩涡振荡器、离心机 维生素A、维生素D、维生素E标品；无水乙醇；正己烷；甲醇（色谱级别） 标准溶液配制 1mg/ml维生素标准储备液：3种维生素标品各0.01g于10ml容量瓶中，甲醇定容。 工作液 浓度（ug/ml) 量取的母液 体积（ml） 定容体积 （ml） 维生素A 40 2 50 维生素D 10 1 100 维生素E 400 4 10 实验方法 3.1 色谱条件设置 色谱柱 C18柱 进样体积(ml） 20ul 泵 流动相 甲醇 97% 纯化水 3% 流速 1ml/min 柱温 25℃ 检测波长 0-8min 315nm 8-12min 265nm 12-16min 290nm 3.2 测定方法 取血清0.2ml置5ml具塞离心管中，加入0.2ml无水乙醇沉淀蛋白质，后加入正己烷1.0ml，旋涡振荡器振荡2min，8000r/min离心5min，吸取上层正己烷液0.5ml，氮气吹干，0.2ml流动相溶解残渣，旋涡振荡器振荡30s，15000r/min离心2min，取上清液到进样瓶。 上机进样 测量物质 波长设置 VA标品 315nm VD标品 265nm VE标品 290nm 血清样品 可变波长 其他色谱条件与上述一致 血液中水溶性维生素的检测 仪器与试剂 HP1220高效液相色谱仪、氮吹仪、涡旋振荡器、离心机、ODS C18固相萃取柱（100mg/1ml） 维生素标准品：VB1、VB3、VC、叶酸；0.01mol/l HCL溶液；1mol/l KOH溶液; 甲醇；50mmol/l NH4H2PO4溶液（PH6.0）； VC提取溶剂：乙二酸四乙酸二钠0.005g，二硫苏糖醇0.05g，加适量水溶解，加入高氯酸1.42ml，加水定容至50ml。 标准溶液配制 VB1、VB3、标准储备液（1mg/ml），用0.01mol/l HCL配制；叶酸标准储备液（1mg/ml）,以1滴1mol/lKOH溶解后，在用0.01mol/l HCL定容。测定时，用0.01mol/lHCL稀释成VB1、VB3、叶酸浓度均为5ug/ml。 VC标准品0.1056g，加水稀释至100ml。移取1.0ml加水稀释至10ml，得到浓度为105.3mg/l的对照品溶液。 实验方法 3.1 色谱条件 色谱柱 C18 进样体积(ml） 20ul 泵 流动相 NH4H2PO4 95 甲醇 5 流速 0.5mol/min 柱温 室温 检测波长 266nm 测定方法 VB1、VB2、叶酸：血清40ul于1.5mlEP管，加0.20ml甲醇，旋涡3min，冷冻放置30min，以8000r/min离心10min，取上清液0.18ml于固相萃取柱中（先活化，用6ml甲醇淋洗，6ml水活化)，以甲醇:水（4:1）3ml混合液洗脱，用10ml定量管收集洗脱液，50℃水浴N2吹至0.20ml（少于0.20ml可用0.01mol/lHCL定容至0.20ml）作为测试液。 VC：血清200ul，加水10ul，加入VC提取溶剂500ul，旋涡2min，8000r/min离心10min，过滤即得供试品溶液。 上机进样 按所设的色谱条件来进标准品，样品。