第四章目的基因的获得酵母双杂交.pptVIP

酵母双杂交系统 目前酵母双杂交实验采用的系统有LexA 系统和Gal4 系统两种。 在LexA 系统中，DNA 结合域由一个完整的原核蛋白LexA 构成，转录激活域则由一个88 个氨基酸的酸性的大肠杆菌多肽B42 构成，它在酵母中可以活化基因的转录; 在Gal4 系统中，BD 和AD 分别由Gal4蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。 进一步分析： ①这种相互作用是否会在细胞内自然发生。 ②有些蛋白依赖于泛素的蛋白酶降解途径成员，它们具有普遍的蛋白间的相互作用。 ③一些实际没有相互作用的蛋白但有相同的模体蛋白也可发生相互作用。 （二） 转化效率偏低 原因：由于酵母转化效率较细菌低4个数量级，因此转化成为双杂交技术的重要瓶颈。 解决办法：引进酵母接合型 a接合型和?接合型（两者之间可形成二倍体，但自身不能） （三）阴性干扰 融合蛋白的表达对细胞有毒性，该怎么办？ 应选择敏感性较低的菌株或拷贝数低的载体 蛋白间的相互作用较弱，应选择高敏感的菌株或多拷贝载体。 蛋白在酵母中不能稳定地表达，或者不能正确地折叠，或杂交蛋白不能转入胞核。 (一) 酵母单杂交系统(one-hybrid system) 酵母单杂交系统原理 酵母单杂交系统原理 酵母单杂交系统应用 (二) 反向酵母双杂交系统（reverse yeast tw