壳聚糖固定化木聚糖酶的研究.docVIP

壳聚糖固定化木聚糖酶的研究 摘要：从青霉菌m8提取出木聚糖酶，将其固定在用戊二醛交联的壳聚糖载体上。对影响固定化木聚糖酶效果的几个单因素如壳聚糖质量浓度、戊二醛体积分数、给酶量等指标进行测定。1.0g壳聚糖与4%的二醛结合固定3.5mg蛋白，酶活回收率为46.6%。固定化酶的最适pH为3.8，原酶为4.6。固定化酶在60-75℃的活性都比较高，而原酶的最适温度为55℃。原酶的耐热性不如固定化酶，且原酶的表观Km值相对于固定化酶略高，固定化酶为5.0times;10-2g/L，原酶为3.58times;10-2g/L。12141 　　关键词：壳聚糖；木聚糖酶；固定化酶 Studies on Chitosan-Immobilized Xylanase Abstract:The extracellular xylanase from Peaicillium was immobilized on chitosan by glutaraldehyde. The results indicated that the immobilized-xylanase prepared by 1.0g chitosan crosslinking with 4% glutaralhyde and then combining with 3.5mg enzyme showed higher enzyme activity and better activity recoveries(46.6%). The optimum pH of soluble enzyme and temperature of soluble enzyme was 55℃, wherease immobilized enzyme showed high activity in 60-75℃. The thermal stability of immobilized enzyme was better than soluble enzyme at 65℃. The apparent Km#39; of the immobilized enzyme was 3.58times;10-2g/L and the substrate. Key Words: chitosan; xylanase; mmobilization 目录 摘要1 引言1 1.材料和方法bull;2 1.1材料2 1.2方法2 1.2.1菌株培养及酶液制备bull;2 1.2.2 壳聚糖载体的制备bull;2 1.2.3 木聚糖酶的固定化bull;2 1.2.4 木聚糖酶活测定bull;2 2.结果与分析bull;3 2.1 戊二醛浓度对固定化酶活力的影响3 2.2 给酶量对固定化酶活力的影响3 2.3 pH对酶活力的影响bull;4 实验仪器有陶瓷研钵、电子天平、移液枪、移液管、恒温水浴锅、台式高速离心机、无菌牙签、2mL无菌离心管、紫外-可见分光光度计、比色皿、吸水纸、微波炉等。 1.2方法 1.2.1菌株的培养以及酶液的制备 菌种为青霉菌，由本实验室提供。菌株培养以及酶液制备的方法按孙迅法[4]。 1.2.2制备壳聚糖载体 参照陈盛方法[5]略加改动，将残余的虾肉去除，并洗干净河虾虾皮，用2-3倍体积的3%的稀盐酸和10%的NaOH反复处理3-4次，每次7-9h，用蒸馏水洗至中性即可。所得的白色物质加入45%的NaOH，并于80-100℃下进行保温处理5-6h后，再次用蒸馏水洗至中性，晒干粉碎，过40目筛即得壳聚糖。 1.2.3木聚糖酶的固定化 取少量壳聚糖于试管中，加入一定量浓度的戊二醛，在常温下搅拌2h，于4℃过夜；离心去上清，水洗2-3次以洗去残留的戊二醛；加入木聚糖酶液在交联后的壳聚糖中，常温下搅拌1.5h，于4℃静置过夜，洗净游离酶，即得到固定化酶。 1.2.4木聚糖酶活的测定 DNS法[6]，经稍加改动，取0.5%半纤维素(50mM pH4.6的醋酸缓冲液配制)1mL，加入一定量的固定化酶(0.1-0.5g)适当稀释的酶液0.5mL或适当稀释的酶液0.5mL，55℃下保温30min后加入3mL的DNS试剂，之后在沸水浴中煮15min，冷却，加水至25mL，混匀后用分光光度计测定光吸收值(550nm处，1cm比色皿)。用煮沸20min或固定化酶作对照。其酶活单位定义为每分钟每毫升酶液水解木聚糖生成1Mu; mol木糖所相当的酶量。 2.结果与分析 2.1戊二醛浓度对固定化酶活的影响 　　分别取6份1g壳聚糖于6个烧杯中，分别加入浓度不同的戊二醛(1-6%)溶液4.0mL，按照上述方法制固定化酶，并测定固定化酶的活力。实验结果表明，随着戊二醛浓度的增大，固定化酶的活力也相应增加，当戊二醛