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化学合成sirnasirna设计方法
siRNA化学合成
化学合成siRNA简介siRNA是应用起来最方便的方法,客户只需提供siRNA序列或者GeneID、Accession Number、基因名称等。
百奥迈科(Biomics)公司的siRNA使用国外最先进的仪器合成,同时配备了高容量的HPLC纯化仪。单个靶点siRNA合成量一次性可放大到克(g)级,年产更达到公斤(Kg)级。产品经过严格质检,确保质量并提供质量检查报告。
化学合成的siRNA与生物合成siRNA相比,有以下优点:
操作简便,研究人员 (一次合成量1 - 100 g)。
特别适用于基因靶位点已确定,需要大量siRNA进行研究iomics的siRNA产品,我们始终为您提供优质热诚的服务!
siRNA设计
siRNARNAi实验的成功与否起着至关重要的作用。不同的siRNA序列,对基因的沉默效率差异很大。因此,理性设计有效的siRNA就成为实验成功的关键因素之一。
本公司推荐考虑如下设计思想:
从起始密码子下游50 - 100个nt开始,避免5端或3端的UTRs,搜索AA (N19) 序列。因为这些区域结合了大量的调控蛋白,可能会影响siRNA发挥作用。
分析siRNA两端能量分布
N19序列3端垂悬两个dTdT,该垂悬不与mRNA序列互补,使有义链3’端更容易解链,从而增加其沉默效率。
21个碱基的siRNA单链序列如:5-GGCCAGAGGUUGAAAGUGAdTdT-3
对mRNA目标区域进行二级结构预测,排除作用复杂的二级结构的siRNA序列。因为二级结构越复杂,siRNA沉默效率越低。
下图表明设计的siRNA结构优势依次递增a) b) c)
在NCBI数据库(/Blast.cgi)中进行Blast对照,排除设计的序列和其他基因的同源性,降低脱靶效应。
避免出现连续的多个G或C,GC含量最好在30 – 55 %之间。
设计中,对siRNA两端的错配可以高度容忍,但中间的5 - 11位碱基的错配,对沉默效应会有较大影响。
本公司专业技术人员免费帮您针对同一个基因设计3 - 4对siRNA,您只需提供基因的Accession Number、mRNA序列或者Gene ID等信息即可,设计好后交您确认,如果抑制效率达不到70 % (转染效率至少90 %),我们免费重新设计和合成。
百奥迈科(Biomics) siRNA产品简介
● siRNA合成:
本公司拥有siRNA合成所有核心技术和专业合成团队,合成规模达到克级 (一次合成量1 - 100 g),不但能够满足细胞水平实验小试,更能满足动物实验中中试放大的要求。
● 标记
可对siRNA两条链的4个末端进行多种标记物的标记,包括FAM、Cy3、Cy5、胆固醇(cholesterol)、BiotinsiRNA抑制特异性基因表达的效果。
● 修饰:
提供siRNA的化学修饰,主要有2’-羟基甲基化修饰,磷酸硫代修饰,氟代修饰等
● 纯化:
HPLC纯化。
● 长度:
19-23nt,亦可根据设计要求合成相应长度的siRNA。
● 产品形式:
冻干粉
● 储存和稳定性:
建议在- 20 °C的环境中贮存,避免反复冻融,可保存6个月。荧光标记的RNA必须避光保存。
● 技术数据表:
技术数据表与siRNA oligo一同交付,包括名称、序列、浓度、OD和nmols的精确数量及纯化类型。
● 个性服务:
按照客户要求分装。
免费设计。
● 运输:
1.5mL冻存管,快递寄送。
普通siRNA oligo
iomics公司普通的siRNA oligo根据客户要求,采用脱盐、PAGE或HPLC纯化的方法,有效去除短、杂片段。客户只需用无RNA酶水稀释后即可使用
我们为客户设计合成四个靶点的普通siRNA,提高筛选出潜在的特异性抑制效率高的序列的机会。
目录号 产品说明 规格 纯化方式 价格 CS1004 普通 siRNA 4 OD HPLC CS1005 普通 siRNA 5 OD HPLC CS1010 普通 siRNA 10 OD HPLC CS1050 普通 siRNA 50 OD HPLC CS1100 普通 siRNA 100 OD HPLC CS1250 普通 siRNA 250 OD HPLC
荧光标记siRNA oligo
可对siRNA两条链的4个末端进行多种标记物的标记,包括FAM、Cy3、Cy5、胆固醇(cholesterol)、Biotin。相对于未标记的siRNA具有转染情况可视的优点,通过流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等可以观察到荧光标记的siRNA,方便优化转染条件、siRNA胞内定位等,同时可根据对转染过程的全程追踪来分析转染和蛋白表达下调的
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