转基因长双歧杆菌介入治疗原发性肝癌实验探究.docVIP

转基因长双歧杆菌介入治疗原发性肝癌实验探究【摘要】目的:探讨转染endostatin基因的长双歧杆菌联合疗法治疗荷瘤兔肝癌模型,观察对肿瘤的作用。方法:将20只荷瘤兔分两组,每组10只,对照组采用介入方法经肝动脉碘油栓塞,实验组应用介入方法经肝动脉碘油栓塞及施放转染endostatin基因的长双歧杆菌联合疗法治疗荷瘤兔肝癌模型,观察两组对肿瘤的作用。结果:术后1个月两组间无差异,六个月后见肿瘤中央均表现不同程度的坏死,对照组8例见肿瘤明显增大,其中2例可见肝内转移灶。实验组只有2例见肿瘤稍有增大,其余均见有不同程度的缩小。结论:转染endostatin基因的长双歧杆菌联合疗法治疗荷瘤兔肝癌模型,可以更好的提高肝癌的治疗效果,是一种值得临床实践的治疗方法。? 【关键词】Endostatin基因;长双歧杆菌;介入;肝癌? doi:10.3969/j.issn.1006-1959.2010.08.068文章编号:1006-1959(2010)-08-2048-02 肝癌是常见的恶性肿瘤,严重地危害我国人民健康。由于肝储备功能较大等原因,临床确诊时多已是中晚期,能够手术根治地病例很少,而目前对于中、晚期肝癌尚缺乏其他满意的治疗手段,临床多以综合治疗为主。Dang L.H.等的研究证实一些厌氧菌能够特异的感染实体性肿瘤内的乏氧细胞,通过去除编码毒素的基因,可以减弱甚至消除细菌的毒性,使其能够适合于肿瘤治疗的目的。而肝动脉栓塞可以阻塞肝癌供血动脉,使肿瘤细胞缺氧,有助于厌氧菌对其感染。感染后的乏氧细胞将会出现坏死,并导致更多的肿瘤细胞乏氧、感染、坏死,从而达到治疗目的。因此,探索研究一种有效的联合治疗方法对提高肝癌的疗效、治愈率具有重要的理论和实用价值。? 1.材料与方法? 1.120只荷瘤兔肝癌模型建立。选用新西兰大白兔,将VX2肿瘤瘤细胞接种于兔大腿部皮下成瘤并传代,2周左右瘤体长至1～2cm??3?后取出肿瘤,切开瘤体取靠近周缘的灰白色鱼肉样瘤组织在剪成1～2mm??3?大小碎块放入生理盐水中,用18G针头1ml针筒抽吸作为瘤种备用。另取新西兰大白兔采静脉麻醉后在上腹部正中作切口暴露肝脏,用镊子轻夹肝左叶将其拉出体外,注入备用瘤种,量为0.1～0.2ml(含3～5个左右组织块),针尖刺入深度1.5～2cm左右,拔针后立即压迫数秒钟后将肝脏回纳入腹腔,缝合伤口。种植后2行CT扫描,检查造模情况。造模成功后,将20只荷瘤兔随机分实验组与对照组,每组10只。? 1.2以endostatin back NcoⅠ及endostatin XhoⅠ为引物从正常人肝cDNA库扩增出endostatin基因,每循环反应条件为,94℃变性45s,56℃退火1min,72℃延伸1.5分钟,共进行35个循环。将扩增出的endostatin基因克隆进pBluescript中,进行序列测定,经序列测定后以NcoⅠ及XhoⅠ双酶切后装入pET-22b(+)载体中,并进行序列测定。厌氧环境下,将质粒用电击法导入厌氧菌。检测、分析、鉴定导入结果,证实endostatin基因导入成功并能有效表达。? 1.3对照组采用介入方法经肝动脉碘油栓塞,实验组应用介入方法经肝动脉碘油栓塞及施放转染endostatin基因的长双歧杆菌联合疗法治疗荷瘤兔肝癌模型。治疗后观察两组肝癌模型一个月及六个月的肿瘤变化情况。? 2.结果? 术后1个月行CT或DSA检查发现两组间无差异,六个月后见肿瘤中央均表现不同程度的坏死,对照组有4例未见任何碘油沉积,8例见肿瘤明显增大,其中2例可见肝内转移灶。实验组只有2例见肿瘤稍有增大,其余均见有不同程度的缩小。? 3.讨论? 原发性肝癌是全球高发的恶性疾病之一,手术切除是目前肝癌首选的治疗方法之一,但大多患者发现时已经错过了手术时机,而且肝硬化,肝内多发病灶,癌栓,远处转移等其它原因也限制了手术的进行。抗血管生成治疗、基因治疗、生物治疗是当今医学研究的热点有着极其重要的发展前景。本文采用转染endostatin基因的长双歧杆菌联合介入治疗肝癌是一种创新。? endostatin基因即内皮抑素基因。内皮抑素是O’Reilly于1997年继发现血管抑素之后,用同样方法在鼠血管内皮瘤细胞的培养上清液中分离出的目前所发现的最强的抑血管生成因子??[1]?。内皮抑素能干扰某些生长因子的促血管生成作用,如碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)。而某些多血管肿瘤如恶性神经胶质瘤则产生VEGF??[2]?。肿瘤如果没有血管供给营养和运走代谢产物,最多只能长到数立方毫米,因此内皮抑素能阻止肿瘤进入临床表现期??[3]?。内皮抑素可干扰促血管生成因子和抗血管生成因子之间在