PMSF及常用试剂的配制方法.doc

PMSF 英文全称：Phenylmethanesulfonyl fluoride 中文名称：苯甲基磺酰氟 分子式：C7H7FO2S 分子量：174.19 CAS号：[329-98-6] PubChem号：4784 结构示意图： 分类： Organic Chemicals Sulfur Compounds Sulfones Phenylmethylsulfonyl Fluoride 使用介绍： 1） 抑制丝氨酸蛋白酶（如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，凝血酶）和巯基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）； 2） 10mg/ml溶于异丙醇（或无水乙醇）中； 3） 在室温可保存一年,一般保存在-20度或4度.； 4） 工作浓度：17~174ug/ml（0.1~1mM），储存液浓度为100或200mM； 5） 在水液体溶液中不稳定，30分钟就会降解一半，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF，样品处理超过1h,补加一次。（见水分解，使用前加入） 【注意事项】 1. PMSF剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。 2. PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。 3. PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 PMSF的储存：2-8℃可以存放数月之久。欲长期保存，可冻存在-20℃ 例:100mM PMSF 称量0.174g PMSF(针状结晶固体)溶于10ml 异丙醇,震荡混匀，保存在-20度或４度.　 工作浓度我一般用1mM ,1:100(V/V)加入即可.样品处理超过1h,补加一次. (PMSF剧毒,为了安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作．PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。） PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节　为碱性（pH8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。 用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。 2、10%过滤酸铵 （1）配制方法：把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4 ℃保存数周。 3、1mol/L 氯化钙 （1）配制方法：在20ml纯水中（Milli-Ce水或相当级别的水）溶解54g Cacl2 ? 6H2O用0.22um滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20 ℃。 （2）说明：制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用纯水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45um孔径）过滤除菌，然后聚冷至0℃。 4、1mol/L二硫苏糖醇（DTT） （1）配制方法：用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20 ℃。 （2）说明：DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。 5、0.5mol/L EDTA（pH8.0） （1）配制方法：在800ml水中加入186.1g=水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na ?2H2O ），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g Naoh颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。 （2）说明：EDTA二钠盐需加入NaoH将溶液的pH值调至接近8.0时，才能完全溶解。 回到页首 6、10mg/ml溴化乙锭 （1）配制方法：在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容光焕发器或转移至棕色瓶中，保存于室温。 （2）说明：小心：溴化乙锭 是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。这些溶液使用后应按附录E提供的方法之一进行净化处理。 7、100mmol/L IPTG 配制方法：IPTG为异丙基硫式- β-D-半乳糖苷（分子量为238.3D），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用