分子病理学技术新进展.doc

分子病理学技术新进展 病理学的发展与使用的工具 和方法的更新密切相关： 解剖刀剪等—进行尸体检查—器官病理学 显微镜—发明百年之后—细胞病理学 电子显微镜—发展—超微病理学 免疫组织化学—促进—免疫病理学 分子生物学—带动—分子病理学 计算机及网络—走进—信息病理学 病理学技术就是如何应用新工具的方法和措施。 从发展过程看，在新工具面前必须首先解决使用的技术及其相应措施，才能在理论上有所发现。所以，我们必须关注那些新工具、新方法，才能得以用于解决病理学中的问题。 病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术 传 统：Formalin固定，石蜡切片和HE染色及特殊染色技术—病理学的基本技术。 新技术：免疫组化、原位杂交、原位PCR、凝胶电泳技术 、核酸杂交技术（包括FISH、CGH） 、 PCR技术 、基因重组技术、基因测序技术、细胞凋亡检测技术、细胞培养技术、流式细胞技术、激光共聚焦、显微切割技术、组织芯片技术、DNA芯片技术等等。 根据科研和临床病理诊断的需要，不断建立和开展新技术，把传统技术和新技术相结合，不断提高病理学技术水平，逐步与国际水平接轨。 常规病理技术 近20余年来，常规病理技术也得到较大发展： 微波方法缩短组织脱水、浸蜡时间； 新的化学试剂取代传统的甲醛、二甲苯； 逐步向自动化发展（全自动封闭式组织脱水机、全自动染色封片系统、全自动特殊染色机等） 细胞病理学技术 ：传统的涂、刮片逐步向 薄层液基细胞学发展 TCT 液基细胞学检测 新柏氏超薄细胞检测仪 特殊染色技术 HE染色虽是一种快捷、经济、且易于掌握的方法，但它不能回答病因学、组织发生及发病机制等许多方面的问题。为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色，固称特殊染色。 在过去的20年里，由于免疫组织（或细胞）化学技术的迅速发展与广泛应用，特染的应用日趋减少，人们感到以组织化学为基础的特染方法似乎有些过时，但实际上它在诊断病理学及研究中仍然有着不可忽视的作用。 特殊染色的方法很多，常用的一些特殊染色的方法介绍如下： 1、网织纤维染色（reticulin stains） 显示网织纤维及基底膜物质。传统的网织染色以银染为基础，有Gomori法,Wilder及Gordon和Sweet法等， 它们在肿瘤病理诊断中具有鉴别诊断作用： 1）区别上皮与非上皮肿瘤； 2）区别某些间叶组织肿瘤； 3）区别原位癌与浸润癌。 2、PAS染色 (periodic acid-schiff) 可以显示糖原、中性粘液物质、基底膜、霉菌与寄生虫。 3、微生物特染 最常用者是革兰氏阳性及革兰氏阴性细菌染色法（BB）、分枝杆菌染色、霉菌染色。 4、嗜银及亲银染色 不需外加还原剂，在黑暗中即有还原银盐的能力，称为亲银性(argentaffin),代表方法Fontana-Masson法。而需外加还原剂或在光线存在时才有还原能力，称为嗜银性（argyrophilic）, 代表方法是非改良的Grimelius法。 5、淀粉样染色 刚果红（congo red）是最可靠且实用的检测淀粉样物质的方法。 6、三色染色（trichrome stains） 可分别显示细胞核、细胞浆及细胞外胶原。 7、磷钨酸苏木素染色（PTAH染色） 一种三色染色的特殊类型，用于显示肌组织及胶质细胞胞浆内的微丝。 8、含铁血黄素、黑色素及钙染色 显示含铁血黄素首选Perls普鲁士兰反应(Prussian blue)。 Fontana-Masson 法是用含氨盐溶液显示黑色素的方法。在显示钙的染色中，von Kossa 法常用。 9、中性脂质染色 油红（Oil red）是最常用的染色方法，但不能用于石蜡包埋的组织。中性脂质（lipids）最常用于肿瘤的诊断与鉴别，可区别卵巢纤维瘤及泡膜细胞瘤、皮脂腺癌与鳞状细胞癌等。 10、粘液染色（mucin stains） 粘液染色法中，阿尔辛蓝(Alcian blue)和PAS联合可显示中性、轻度酸性及高度酸性粘液物质，故是最好的全粘液(pan- mucin)染色法。 11、 Giemsa染色 常用于涂片及切片染色。可清楚的显示并区分不同分化阶段的淋巴造血细胞，并可将肥大细胞浆染成紫红色颗粒，故在上述瘤性及反应性增生的诊断中有重要作用。 12、 髓鞘（myelin）染色 分正常髓鞘染色和变性损伤髓鞘染色。最常用的方法为Luxol坚固蓝(Luxol fast blue)法。 13、 弹性纤维（elastic fibers）染色 最