实验补充教材1.doc

药物分析实验补充材料 题目：高效液相色谱法用于阿司匹林肠溶片中游离水杨酸检查和阿司匹林含量测定 目的：（1）了解高效液相色谱仪器及相应配套仪器的构成、作用及正确使用方法。 （2）掌握高效液相色谱仪的分析软件的使用方法。 （3）掌握高效液相色谱法用于阿司匹林肠溶片中特殊杂质检查和含量测定的方法。 （4）比较阿司匹林肠溶片中游离水杨酸检查的比色法，阿司匹林含量测定的两步滴定法和本实验采用的方法的优缺点。 实验内容： 1.仪器与试药 高效液相色谱仪（包括柱温箱，可变波长紫外-可见检测器，进样器等），分析天平，超声波清洗器 阿司匹林对照品，水杨酸对照品，阿司匹林肠溶片 甲醇（分析纯），四氢呋喃（色谱纯），冰醋酸（色谱纯），乙腈（色谱纯）等，超纯水（实验室自制）。 2. 供试品溶液的制备： 取本品20片，精密称定，研细，备用，并计算平均片重。取本品细粉适量（约相当于阿司匹林0.1g），精密称定，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为溶液1。取适量溶液1滤膜滤过，取续滤液作为游离水杨酸检查用供试品溶液（临用新制）。精密量取滤液5ml，置50ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，取适量溶液滤膜滤过，取续滤液作为阿司匹林含量测定用供试品溶液。 3.对照品溶液的制备： 取水杨酸对照品约15mg，精密称定，置于50ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置于100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液振摇溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为水杨酸检查的对照品溶液。 取阿司匹林对照品，精密称定，用1%冰醋酸甲醇溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液作为含量测定对照品溶液。 4.色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相；检测波长为303nm。理论板数按水杨酸计算不低于3000，阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。 4.1 精密量取供水杨酸检查用供试品溶液、水杨酸对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有与水杨酸峰保留时间一致的色谱法，按外标法峰面积计算，含游离水杨酸不得超过阿司匹林标示量的1.5%。 4.2 精密量取供含量测定用供试品溶液、阿司匹林对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算供试品中阿司匹林的含量。 说明：（1）采用酸性甲醇制备供试品溶液，以抑制阿司匹林水解产生水杨酸，同时供试品溶液临用新制也是为了减少阿司匹林水解产生的水杨酸的影响。 （2）为节约时间，游离水杨酸检查和阿司匹林的含量测定的供试品溶液的制备一并进行，只是做适当的定量稀释。 （3）流动相配制好后，需要超声波脱气3-5分钟，以避免流动相中溶解的气体对实验的影响，同时流动相需要过0.45μm滤膜，以防止流动相中的颗粒对色谱柱的影响。 （4）开机后，以1ml/min流速，先用10%的甲醇-水溶液冲洗色谱系统15分钟，再用流动相平衡30分钟后进样分析。 （5）对照品溶液需进两针样，供试品需要配制2份平行溶液，每份溶液进样2针，分别计算含量，并取平均值作为含量测定的结果。 （6）实验报告需要结合前期游离水杨酸检查的比色法结果和阿司匹林肠溶片两步滴定法的测定结果，进行比较分析，说明本实验的方法的优缺点。 思考题：（1）供试品溶液制备中为什么要选用1%冰醋酸甲醇溶液作为溶剂？为什么供试品溶液需要临用新制？供试品溶液为什么需要滤过，取续滤液使用？除滤膜滤过外，还有什么方法可以达到同样的目的？ （2）流动相为什么需要过滤和超声波脱气？ （3）系统适应性试验的目的是什么？ （4）《中国药典》2010年版水杨酸检查采用303nm作为检测波长，而阿司匹林含量测定采用276nm作为检测波长，为什么？本实验均采用303nm作为检测波长，对阿司匹林含量测定的准确度有无影响？ 参考文献：（1）《中国药典》2010年版，385页，化学工业出版社，2010年。 （2）现代药学实验教程，吴勇等，四川大学出版社。