利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医 2016 ,43(5):1125-1132 China Animal Husbandry Veterinary Medicine doi: 10. 16431/j. cnki. 1671-7236. 2016. 05. 001 利用脂质体法建立转 Toll 样受体 4 基因大尾寒 羊胎儿成纤维细胞株的研究 邢书涵，李方舟，曹玉桃，顾美超，倪和民，刘云海，郭 勇给 (北京农学院动物科学技术学院，兽医学(中医药)北京市重点实验室，北京 102206) 摘 要:利用脂质体转染法获得转 Toll 样受体 4 (Toll-like receptors 4 ,TLR的基因的成纤维细胞，将其作为供体 细胞，再通过体细胞核移植技术构建重构胚，最终生产出转 TLR4 基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代 培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞，并进行 SRY基因性别鉴定，利用脂质体转染法转入 TLR4 基因，然后分别从 形态学与分子水平检测 TLR4 基因的表达，将稳定表达转 TLR4 的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建 重构胚。最终获得 5 个稳定表达 TLR4 的阳性细胞克隆，经 SRY基因性别鉴定为雌性细胞株，通过实时荧光定量 PCR 分析，在第 4 代转染的细胞中 TLR4 表达量最高，比未转染细胞高出 7.4816 倍(PO. 0 1)，卵裂的重构胚中有 EGFP 的表达。试验成功构建出含 TLR4 基因的重构胚，为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠 定基础。 关键词:大尾寒羊;脂质体转染;TLR4 基因;重构胚 中图分类号:Q813 文献标识码:A 文章编号: 1671-7236(2016)05-1125-08 Establishment of Fetal Large-tailed Han Sheep Fibroblasts Cell Line Transfected with Lipofectamine 2000 Vector Containing TLR4 Gene XING Shu-han , LI Fang-zhou , CAO Yu-tao , GU Mei-chao , NI H e-min , LIU Yun-hai , GUO Yong普 CBeijing Key Laboratory of TC归归， College of Animal Science and Technology , Beijing University of Agriculture , Beijing 102206 , China) Abstract: Exploiting the method of liposome transfection to obtain modified Toll-like receptors 4 (TLR4o) gene fibroblast cells as competent donor ,build reconstructed embryos ,which finally pro- duced transfected TLR40 gene and gender controllable Large-tailed Han sheep by somatic cell nu- clear transfer technology. In this study , through primary culturing the fetus dermal fibroblasts from Large-tailed Han sheep , to identify the SRY gene gender. Using the method of liposome transfection transferred TLR4 gene into fibroblast cells , then detected whether