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华北落叶松AFLP反应体系的建立和优化.pdf
安徽农业科学，Joumal of Anhui A伊. i.2011 ,39(2) :697-7∞ 责任编辑乔利利责任校对卢瑶
华北落叶松 AFLP 反应体系的建立和优化
李晓楠，狄晓艳*，王孟本 (山西大学黄土高原研究所，山阴太原 03附)
摘要 [目的]建立和优化华北落叶松(l.arix priTU伊萨呻Prechtii Mayr. )的 A贝P 反应休系。[方法]以华北落叶松为材料，对其 AFLP 分
析过程中的5 个主要影响因素(酶切时间、内切酶用量、DNA 模板用量、连接产物和预扩增产物稀稀倍数)进行了研究。[结果]确立了
适于华北落叶松 AFLP 分析的最佳反应体系，即在反应体积均为 20.0 川的前提下，酶切时间为 7 h(37 c 3.5 h;65 c 3.5 h) ,EcoR 1和
Mse 1 内切酶用量均为 1 U ， DNA 模板用量为3.0μ(50 ng/μ1) ，连接产物稀释10 倍取5.0μ 用于预扩增，预扩增产物稀锋70 倍取4.0 j.Ù
用于选择性扩增。[结论]采用该体系得到的电泳条带清晰可辨、多态性好、重复性强，可用于对华北落叶松遗传多样性和分子进化特征
的深入研究。
关键词 华北落叶松;AFLP 反应体系;建立;优化
中图分类号 579 1. 22 文献标识码 A 文章编号。当17 -6611(2011)但-仪脚7 -04
Establishment and Optimization of AFLP Reaction System in pr讪ce Rupprecht s Larch
LI Xiao-uan et al (Institute of Loess Plateau , Shanxi university , Taiyuan , 5hanxi 03仪沁6)
Abstract ( Objective J The aim w臼 to es时llish and optimize the AFLP reaction sy耐m in prince rupprecht s larch. [Method J Takí吨μ巾
pπ/1(ψis-n伊oprechtii Mayr. as tested material , 5 maín influencing factors líke the time of DNA digestion , the 田nount of endonucleases EcoR 1
and M..e 1 , the amount of template DNA and the dilution times for !igated product and pre-amplification product. were experimentally ex田F
ined with 20. 0μ1 reactíon system. [Result] An efficient and stable AF四reactíon system w田 estahlished as follows: 7 hours (37 c 3.5 h;
65 c 3.5 的。f DNA digestion; 1 U of EcoR 1 and Mse 1 e町mes ， respectively; 3.0 11-1 (50 ngl~ι1) of template DNA; 5.0μ1 of ligated
product diluted by 10 times; and 4. 0μof pre-amplification product diluted by 70 times. [Conclusíon 1 AFLP bands obtained through the 肥，
action system were clear , híghly polymo叩hic 拥d reproducible ，曲也e AFLP reaction system could be used in further studies on genetic diver-
síty and molecular evolution of l.arix priTICψis-rupprechtii.
Key words Larix princ仰-ruppr配， -htii; AFLP reaction sy配m; E
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