双抗体夹心ELISA测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立.pdfVIP

检验医学２０１３年１０月第２８卷第１０期 ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１３，Ｖｏｌ２８．Ｎｏ１０． ９·１３ · 文章编号：１６７３８６４０（２０１３）１００９１３０４ 中图分类号：Ｑ５５５ 文献标志码：Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１３．１０．０１２ 双抗体夹心ＥＬＩＳＡ测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立 张 健， 简敏华， 蒋玲丽， 葛丹红 （上海市临床检验中心，上海２００１２６） 摘要：目的 建立测定人血清广泛型线粒体肌酸激酶（ｕＭｔＣＫ）浓度的双抗体夹心酶联免疫吸附试验 （ＥＬＩＳＡ）。方法 应用原核表达的ｕＭｔＣＫ重组蛋白免疫小鼠获得７株单克隆抗体，采用棋盘格滴定法筛选出最 佳双抗体组合，其中抗体１９Ｆ１１进行辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记作为检测抗体，抗体３Ｃ１作为俘获抗体，建立检 测人ｕＭｔＣＫ双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法，并进行方法学评价。同时采用该法检测５０名健康体检者和８５例肿瘤标志 物［甲胎蛋白（ＡＦＰ）或癌胚抗原（ＣＥＡ）］阳性患者的血清。结果 通过筛查获得配对抗体，建立检测人ｕＭｔＣＫ 的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。该法的检测限为２８．８ｎｇ／ｍＬ，批内变异系数（ＣＶ）为４．５％～７．７％，批间ＣＶ为 ８．２％～１３．５％，平均回收率为９７．１％。用该法检测５０名健康体检者血清ｕＭｔＣＫ浓度，结果均为阴性；８５例肿 瘤标志物阳性患者中有１５例检出ｕＭｔＣＫ，浓度为５２．８～１４４２．２ｎｇ／ｍＬ。结论 建立的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ可以 用于测定人血清ｕＭｔＣＫ浓度。 关键词：线粒体肌酸激酶；广泛型亚型；酶联免疫吸附试验 ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡ ｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅ ＺＨＡＮＧＪｉａｎ，ＪＩＡＮＭｉｎｈｕａ，ＪＩＡＮＧＬｉｎｇｌｉ，ＧＥＤａｎｈｏｎｇ． （ＳｈａｎｇｈａｉＣｅｎｔｅｒｆｏｒ ＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００１２６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｆｏｒ ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅ（ｕＭｔＣＫ）ｉｎｈｕｍａｎｓｅｒｕｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｓｅｖｅｎｓｔｒａｉｎｓｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｇａｉｎｓｔｈｕｍａｎｕＭｔＣＫｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄｗｉｔｈｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍｒａｔｓ， ａｎｄｔｈｅｂｅｓｔｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｂｙｃｈｅｃｋｅｒｂｏａｒｄｔｉｔｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｕＭｔＣＫｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｕｓｉｎｇＨＲＰｌａｂｅｌｅｄＭｃＡｂ１９Ｆ１１ａｓａｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄＭｃＡｂ３Ｃ１ａｓａｃａｐｔｕｒｅａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｔｈｅｓｅｒｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆｕＭｔＣＫｉｎ５０ｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓａｎｄ８５ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｐｏｓｉｔｉｖｅｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒｓ［ａｌｐｈａｆｅｔａｌｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ）ａｎｄ ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ（ＣＥＡ）］ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴｈｅｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｙｓａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡｆｏｒｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｕＭｔＣＫｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｓｅｌｅｃｔｉｎｇｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｕｂｌｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｔｈｅｄｅｔｅ