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第六章 基因工程复习 一、基因工程的基本工具 1．基因的“剪刀”----- . （1）分布：主要在 生物中。 （2）作用特点: 性，识别特定 ，切割特定切点。并且使每一条链中的特定的部位的两个核苷酸之间的 断开。 （3）结果：产生 ，即被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的 ，他们之间正好 。 （4）实例：EcoRⅠ限制酶能专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开 画出结果： 思考：要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 2、化学浆糊----- .?? （1）作用部位： 磷酸和脱氧核糖之间的键。 （2）作用结果：形成 。 思考： 1)DNA连接酶和DNA聚合酶的区别是？ 2)DNA水解酶和DNA解旋酶的作用和上面两种酶有什么不同？ 3、运载体 （1）常见运载体有 。其本质为 。一般存在于 中。还可以作为运载体的有 等。 （2）作用：将 基因送入 细胞。 （3）具备的条件： 能在宿主细胞内保存，并能大量 ； 有 个限制酶切点；具有某些 基因，以便进行基因工程的基本步骤一是鸟枪法二是用的方法：转录法根据已知的序列合成DNA。下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图回答： （1）过程必需的酶是____酶，过程必需的酶是____酶。若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶个。）能否利用人的皮肤细胞来完成过程?____，为什么? ____。）工程中，需用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC一，限制酶II的识别序列和切点是一↓GATC一。根据图示,判断下列操作正确的是： A．质粒用限制酶I切割，目的基因用限制酶II切割 B．质粒用限制酶II切割，目的基因用限制酶I切割 C．目的基因和质粒均用限制酶I切割 D．目的基因和质粒均用限制酶II切割下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。下列说法错误的是(　　) A．一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后，含有4个游离的磷酸基团 B．用图1中的质粒和图2中的目的基因构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割 C．图2中为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，不能使用EcoR Ⅰ D．为了获取重组质粒，最好用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ同时切割质粒和外源DNA 某研究所的研究人员将生长激素基因通过质粒介导进入大肠杆菌细胞内，来表达产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因：A是抗链霉素基因，B是抗氨苄青霉素基因，且目的基因要插入到基因B中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因。下列叙述正确的是(　　) A．导入大肠杆菌的质粒一定为重组质粒 B．DNA连接酶和RNA聚合酶是构建该重组质粒必需的工具C．可用含氨苄青霉素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒 D．在含氨苄青霉素培养基中不能生长，但在含链霉素培养基中能生长的可能是符合生产要求的大肠杆菌 DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是________ _____ 。 （2）在构建含目的基因的重组质粒A时，如果使用EcoRⅠ进行酶切，则含目的基因的外源DNA 片段和质粒在DNA连接酶的作用下，至少可形成 种环状产物，因此为防止含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用__________ (限制）酶进行切割。 （3）在构建重组质粒时，应注意到不能影响质粒的 _____________________。 （4）香蕉组织细胞具有________________性，因此，可以利用组织培养技术将导入目的(抗病)基因的香蕉组织细胞培育成完整植株。图中④、（5）依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的_________、____________。 （6）培养皿中的培养基除添加营养物质外，还需要添加____________________等植物激素，其目的是诱导外植体完成④、⑤生理过程，