如何对表达载体进行选择及读谱方法.docVIP

如何对表达载体进行选择及读谱方法(转) 前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一个合格质粒的组成要素： 　　（1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。 　　（2）抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ 　　（3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 　　（4） P/E 启动子/增强子 　　（5）Terms 终止信号 　　（6）加poly（A）信号 可以起到稳定mRNA作用 　　选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。 　　载体选择主要考虑下述3点： 　　【1】构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。 　　【2】.载体的类型： 　　（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如10kb选质粒。 　　（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。 　　（3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相