基于点击化学反应的免疫荧光检测方法的建立和应用.pdfVIP

Vo l. 32 高等学校化学学报 No.2 2011 年2 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERS盯lES 281 - 285 基于点击化学反应的免疫荧光 检测方法的建立和应用 张奇1 ，王彬1 ，黎霞2 ，侯洁1 ，白芳1 ，孙丹2 ，\白钢1.2 (1.南开大学药学院， 2. 生命科学学院，天津3α)()7 1) 摘要 报道了一种新型免疫荧光标记方法及其在细胞荧光检测中的应用.首先，合成了 2 个关键的化合物 6-叠氮·己酸唬珩酸亚胶活钟，酶和4-乙快慕-N-乙基-1 ， 8-荼眈亚膀，并将合成的6-叠氮·己酸唬跑回先亚胶活性 醋与抗her2 抗体Anti-HP15 的游离氨基偶联获得叠氧化 rgG;随后通过铜离子催化4-乙快基-N-乙基-1 ， 8-裴 既可E胶中的快基与标记抗体的叠氮基团进行点击化学反应，同时以NHS-FITC 和 NHS-Rhodamine 标记的抗体 为阳性对照，测定了该标记方法的灵敏度，其检出限可达0.1 阔， EC 结果与阳性对照相当.然后，在细胞 50 水平上进行染色分析.结果表明，叠氮标记抗体可有效应用于免疫荧光染色分析.最后，采用激光共聚焦三 通道复合荧光分析法对不同标记方法及其对应的免疫荧光显色方法进行了研究，确认采用本文方法标记的 抗体可与其它免疫荧光技术同时使用，且结果互不干扰.本研究通过开发一种新型的抗体标记技术，建立了 一种新的免疫荧光抗体分析方法，并在细胞水平上进行了应用验证，丰富了免疫荧光抗体检测手段，该方法 在未来的免疫研究中具备发展潜力和广泛的应用前景. 关键词 点击化学;免疫荧光分析;生物偶联 申固分类号 0657 文献标识码 A 文章编号 0251 -0790 (2011 ) 02 -0281 -05 点击化学是通过小单元的拼接来快速、可靠地完成各种分子的化学合成[1.2] 它尤其强调以碳·杂 原子键(C-X-C)合成为基础的组合化学新方法，并借助该反应来简单、高效地获得分子多样性.由 于点击化学产物元毒，且稳定性好，已被广泛用于药物筛选、药物开发、聚合及其它生物体外和体内 分析研究[3-6] 生物偶联技术是通过小分子化合物对生物大分子进行修饰的一种技术，已被广泛用于分子生物学 和化学生物学等领域，如用于蛋白质、核酸等的荧光团标记、修饰、配体整合及放射性同位素标记等. 免疫荧光抗体技术是使用一个特殊的荧光标记物共价连接到任意一种抗原或抗体上，并通过荧光 显微镜进行检测的方法.目前， FITC 和罗丹明等荧光标记物已被广泛用于免疫荧光分析技术中，此 外，利用生物素·亲和素系统的免疫检测系统也被广泛应用[7.8] 本研究通过合成两种化合物，即 6-叠氮-己酸唬E自1耽亚股活性醋和4-乙快基-N-乙基-1 ， 8-荼酷亚 肢，利用点击化学荧光显色反应，开发了一种新的免疫分析方法，在细胞水平上证明了该方法可与传 统的抗体标记技术和生物素·链霉亲和素免疫荧光检测系统同时使用，信号互不干扰，且具有相同的检 测灵敏度.将该方法成功地用于细胞水平的免疫枪测，原理如图 1 所示.在免疫球蛋白 IgG上引人叠 氨基团，利用抗原·抗体特异性反应，叠氮化的 IgG 与对应的抗原特异性结合，随后加入4-乙快基-N-乙 基-1 ， 8-荼酷亚股和相应的催化剂，经点击化学反应后，通过激光共聚焦显微镜在365 nm 激发光下观 察，可见明显的蓝色荧光.本研究通过开发的一种新型的抗体标记技术，建立了一种新的免疫荧光抗 体分析方法，并在细胞水平上进行了应用和验证，丰富了免疫学检测体系和荧光抗体检测手段，在未 来的免疫研究中具备发展潜力和广泛的应用前景. 收稿日期: 20 IO .{)4.{)9. 基金项目:国家九七三计划项目(批准号: 2(郑7C8914803)