以真菌SBE－14菌体干重（Y1）和培养液中Austdiol-中山大学化学学院.PPT

南海红树林内生真菌SBE-14培养条件的优化研究 指导教师 : 佘志刚 副教授 答 辩 人 : 包云玉 专 业 : 应用化学(化学生物学) 海洋微生物代谢产物研究现状 选题意义 研究方案 实验及讨论 实验结论 致谢 一、海洋微生物代谢产物研究现状 一、海洋微生物代谢产物研究现状 在过去10多年中已从海洋生物中分离到数百种有机化合物, 其中近百种属世界上首次发现。有的化合物结构奇特, 在陆地生物中从未发现过。不少具有降血压、抗心律失常、抗癌、消炎等活性。 相对于天然产物研究的丰富成果，海洋真菌的研究工作起步较晚，但进展很快。20世纪80年代末，海洋真菌的研究工作开始初步发展，至今已成为海洋微生物研究的热点之一。 一、海洋微生物代谢产物研究现状 《Marine Natural Products》中海洋真菌的研究统计（图1） 一、海洋微生物代谢产物研究现状 从海洋微生物中寻找新药具有很大的优势。寻找红树林真菌生理活性天然产物的化学研究只在几年前才开始，而红树林内生真菌代谢物的研究则是刚刚开始起步。因此，其前景非常广阔。 二、选题意义 本论文研究的红树林内源真菌（编号NO. SBE-14），采自香港，菌种分别保存在香港城市大学和中山大学内。经由中山大学郭志勇博士的研究，在真菌SBE-14的甲醇混合溶液提取物及培养液提取物中已分离到16个化合物，其中3个新化合物。 本人所在的课题小组，在对南海红树林内生真菌SBE-14的活性代谢产物的进一步研究中，又陆续分离得到了几种具有抗肿瘤活性的化合物，如：对神经质瘤有抑制效果的Austdiol；体外抑制两种不同口腔癌细胞KB，KBv的IC50 都小于1μg/mL的Secalonic acid A等。 二、选题意义 化合物Austdiol和Secalonic acid A的结构式（图2） 二、选题意义 从海洋红树林内生真菌SBE-14中分离发现的有良好药理活性的代谢产物，对于开发新型药物具有积极的意义。但是，如何才能大量获取目标代谢产物，以达到大规模制药的需求，则需要我们对真菌SBE-14进行培养条件的优化设计，寻找最利于产生目标代谢产物的最优化培养条件，以达到大量生产目标代谢产物的目的，为其进一步深入的药理研究，甚至最终的成药，提供来源基础。 三、研究方案 真菌SBE-14在三种培养基中的形态 四、实验及讨论 4.1 初筛确定最适碳、氮源 真菌SBE-14 对碳源的需求， 如图3和表1： 四、实验及讨论 4.1 初筛确定最适碳、氮源 　　　综合菌体干重和目标代谢产物Austdiol的产量，确定葡萄糖为本实验中真菌SBE-14培养的最适C源。本人所在的课题小组，在之前对南海红树林内生真菌SBE-14的培养中，已发现它在土豆培养基(PDA)中生长情况很好。结合本实验的分析结果，亦可得到同样的结论。故将土豆浸液作为真菌SBE-14培养的最适N源。 四、实验及讨论 4.２ Plackett-Burman 法初步优化培养基组成 　　　 　　　本试验选定８个因素为自变量，以真菌SBE－14菌体干重（Y1）和培养液中Austdiol浓度(Y2)为响应值，根据 Plackett-Burman设计原理，选定N =12 对8个因素及一个误差项（X9）进行研究，各因素均取两个水平：高水平“ 1 ”和低水平“ -1 ”。 首先对12组复筛培养基培养液提取物，进行HPLC 分析，并通过各组在tR=6.06处的保留峰峰面积计算其浓度，最终得到了培养液中代谢产物Austdiol 的含量 　 再对复筛培养基培养液提取物，进行LC-MS检测，在tR = 5.64 时的ESI-MS (+c) 显示出 m/z=237.1 的基峰，与标准物 Austdiol 的分子离子峰相同，再次证明了培养液中有Austdiol 产生。 各因素主效应分析结果（表5） ： 运用Plackett - Burman法，对表中的数据通过逐步回归分析，获得最优多元一次回归方程为： Y1 = 1.069362 + 0.2912610*X2 + 0.2700670*X5 Y2 = 0.761239 + 0.404630*X2 - 0.121882*X3 + 0.254203*X5 + 0.306676*X6 + 0.325856*X7 四、实验及讨论 4.２ Pl