有机磷农药对植物酯酶的抑制及应用的分析研究.pdfVIP

有机磷农药对植物酯酶的抑制及应用研究 摘要 随着蔬菜中农药残留引起的食品安全问题的频发，农药残留的快 速检测受到人们的普遍重视。植物酯酶抑制法由于其酶源易得，提取 和保存方便，检测成本低、测量准确度较好，可以满足有机磷农药残 留检测市场化要求等优点，成为近年来有机磷农药残留快速筛选的研 究重点。 本文以市售面粉为植物酯酶的提取原料，与一定比例的水混合， 经浸泡15h、离心后得到以融乙酸萘酯为底物的植物酯酶。利用植物酯 酶活性可被有机磷农药所抑制的毒理机制，测定马拉氧磷、异马拉硫 磷、甲胺磷及其对映体抑制植物酯酶的动力学常数(岛、肠、乞)和半 抑制浓度(IC50)，为探索植物酯酶抑制法的动力学作用机理提供对映体 层面的数据支持。结果显示：各农药对植物酯酶的抑制均存在不同程 度的对映体选择性。犬构型的马拉氧磷对植物酯酶的抑制能力约为购 型的2倍，外消旋马拉氧磷的抑制毒性介于两者之间；缃型的甲胺磷 抑制植物酯酶的毒性为尺构型甲胺磷的4--8倍，外消旋甲胺磷的抑制能 力介于其中；而异马拉硫磷四个对映体抑制植物酯酶的能力大小顺序 映体。 在不添加肟类等重活化剂的条件下，在植物酯酶活性被农药(甲 胺磷、马拉氧磷、异马拉硫磷及其对映体)抑制90％的体系中加入20 倍体积的磷酸盐缓冲溶液测定磷酰化酶的自发重活化速率。对于 l 且 体之间的差异性十分显著；马拉氧磷抑制后，相应的磷酰化酶均能发 Somalaoxon，但两对映体问的差异性很小；异马拉硫磷及其各对映体 为了获得纯度更高的酶以提高其实际应用性能，对植物酯酶进行 了分离纯化的研究。结果显示，植物酯酶租酶液经过硫酸铵分段盐析、 G．100凝胶层析两步纯化后，得到的第1组分纯化了约8．3倍， Sephadex 第1I组分纯化了约为7．4倍。通过采用SDS．PAGE垂直板型电泳法分别 G．100凝胶层析后酶液 检验粗酶液、硫酸铵分段盐析后酶液、Sephadex G．100凝胶层析后的植物酯酶的纯度有了明显的 的纯度，发现Sephadex 提高，且组分I的纯化程度比组分II略好。 在本实验条件下，以抑制率10％作为检测阈值时，确定了植物酯酶 抑制法对甲胺磷、敌敌畏、辛硫磷、马拉硫磷、乐果五种农药的最低 检出限范围为0．036 mg／kg～2．319mg／kg，与《食品中农药最大残留限量》 标准比较，证实了本法检测部分有机磷农药的敏感性尚可。且利用硫 酸铵分段盐析纯化后的酶测定甲胺磷、辛硫磷和马拉硫磷的检出限的 灵敏度比粗酶提高了2～3倍，为本方法的进一步优化提供了依据。 关键词：植物酯酶；动力学常数；纯化；有机磷农药残留 有机磷农药对植物醑酶的抑制及应用研究 RESEARCHAND APPLIC』气TION oNPLANT．ESTERASEINHIBITION BYoRGANOPHOSPHOROUS PESTICIDES ABSTRACT With ofaccidentrelated in with residues frequentoccurring pesticide attentionis tothe of