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网上辅导7（第13-15章） 维生素药物的分析 第一节 维生素A的分析 一、结构与性质 维生素A的结构为具有共轭多烯侧链的环己烯，故具有许多立体异构体。 1．溶解性 维生素A不溶于水，易溶于有机溶剂。 2．不稳定性 维生素A结构中含有共轭多烯醇侧链，所以性质活泼，不稳定。易被氧化剂氧化，易被紫外光裂解。 3．紫外吸收特性 维生素A结构中有多个共轭不饱和键，在紫外光区有强吸收，可用于鉴别和含量测定。 4．与三氯化锑呈色 维生素A在氯仿溶液中与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。二、鉴别试验 维生素A的鉴别可用三氯化锑反应、紫外分光光度法和薄层色谱法等。 三、含量测定 （一）紫外分光光度法（重点、难点） 1．三点校正法的建立：维生素A在325~328nm的波长范围内具有最大吸收，可用于含量测定。但维生素A原料中常混有其他杂质，干扰维生素A的测定。 为消除非维生素A物质引起的无关吸收所引入的测定误差，以求得维生素A的真实含量，建立了三点校正法。即在规定条件下用校正公式计算吸收度Amax（校正）后，再进行计算。可消除无关吸收，测得维生素A的真实含量。 2．测定原理 本法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。其原理主要基于以下两点： （1）杂质的无关吸收在310~340nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸收度下降。 （2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收的叠加。 3． 波长选择 三点波长的选择原则为一点选择在维生素A的最大吸收波长处（即λ1）；其它两点选择在λ1的两侧各选一点（λ2和λ3）。 （1）第一法（等波长差法）：使λ3－λl＝λl－λ2。中国药典规定，测定维生素A醋酸酯时，λl＝328nm，λ2=316nm，λ3＝340nm，Δλ=12nm。 （2）第二法（等吸收比法）：使＝＝6/7。中国药典规定，测定维生素A醇时，λl＝325nm，λ2＝310nm，λ3＝334nm。 4．测定方法：维生素A测定法有“第一法”和“第二法”两种方法（中国药典2000年版）。 （1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯） （2）第二法（皂化法，适用于维生素A醇） 第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯） （1）测定方法：供试品适量→精密称定→环己烷溶解→定量稀释制成每1ml中含9~15单位的溶液→照分光光度法→测定其吸收峰的波长→分别在300、316、328、340和360nm波长处测定吸收度（如不在326~329nm之间，则改用第二法测定）→计算各波长处的吸收度与波长328nm处吸收度的比值和波长328nm处的值。 （2）含量计算： 每1g供试品中含有的维生素A的单位= （328nm）×1900 （3）校正步骤： ① 如果吸收峰波长在326~329nm之间，且所测得各波长比值不超过表13-2中规定的0.02，则用A328（实测）计算。 ② 如果吸收峰波长在326~329nm之间，但所测得的各波长吸收度比值超过表13-2中规定值的0.02，应按下式求出校正后的吸收度，并计算校正吸收度与实测吸收度的差值对实测吸收度的百分率（简称差值百分率）。 A328（校正）=3.52（2A 328-A 316-A 340） ③ 如差值百分率在-3.0 %~ +3.0 %之间，则不用校正吸收度，仍以实测吸收度计算含量。 ④ 如差值百分率在-15%~ -3 %之间，则以校正吸收度计算含量。 ⑤ 如差值百分率＜-15%或＞+3 %，则供试品须按第二法测定。 （4）生物效价和换算因数： 1g维生素A醋酸酯相当的单位数是： ∵ 维生素A醋酸酯的吸收系数为1530 ∴ 换算因数 应用示例：中国药典收载的维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴剂等均采用本法测定含量。 维生素AD胶丸的测定：精密称取维生素AD胶丸装量差异项下的内容物重0.1287g（每丸内容物的平均装量0.07985g，标示量每丸含维生素A 10 000单位），置10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置另一50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测得最大吸收波长为328nm，并分别于300、316、328、340和360nm的波长处测得吸收度如下，求胶丸中维生素A占标示量的百分含量？ 波长（nm） 300 316 328 340 360 测得吸收度（A） 0.374 0.592 0.663 0.553 0.228 解： （1）计算各波长处的吸收度与328nm波长处的吸收度比值，并与规定比值比较。 波