壬基酚对中华新米虾几种生化指标影响.docVIP

壬基酚对中华新米虾几种生化指标影响 中华新米虾（Neocaridina denticulata sinensis）属于甲壳纲，十足目，匙指虾科，米虾属。中华新米虾是一种小型淡水虾类，具有生长迅速，生命力顽强，对环境的适应能力较强，生长周期短，容易饲养等优点，是一种优良的实验材料。 壬基酚（nonylphenol,NP）被广泛用于非离子润滑油添加剂、表面活性剂、洗涤剂等，因而也成为重要的环境污染物。壬基酚是一种环境内分泌干扰物，具有一定的类雌激素样作用，严重影响雄性生物的生殖能力。据统计，全世界每年大约有50万吨的NP进入水体或土壤，被水生生物所摄取并对其产生毒害，NP在其体内积累，通过食物链对人类造成影响。 根据文献[1]报道水体中含有壬基酚的浓度，以20.1 mu;g/L作为环境剂量，研究壬基酚对中华新米虾肌肉内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽-S转移酶（GST）、丙二醛（MDA）的作用，通过测定SOD、GST、MDA、蛋白质含量，研究壬基酚对水体中中华新米虾肌肉内的酶的毒害作用，进而研究NP对中华新米虾的影响。 1材料和方法 中华新米虾采于河北白洋淀，对中华新米虾进行分组养殖，实验期为30 d，养殖期间保持养殖水体温度在23～26 ℃，pH 7.8～8.3，溶氧量＞5 mg/L。实验用自制饲料（饲料配方主要参照Wang H W et al. [2]的实验饲料配方）。根据文献[2]结果，设定环境中壬基酚的环境剂量为20.1 mu;g/L。用南京建成生物工程研究所生产的超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、谷胱甘肽”S转移酶（GST）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒，按照试剂盒的步骤测定SOD, 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子（O2-.），O2-.可将氮蓝四唑（NBT）还原为蓝色的甲臜（formazan），后者在560 nm处有吸收。SOD可清除O2-.，从而抑制了甲臜的形成。反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。测定GST，GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340 nm；通过测定340 nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。测定MDA，测定方法是丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5prime;-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸收高峰，并且在660 nm处有较小光吸收。根据其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 2结果与分析 空白对照组和酒精对照组中由于不含有壬基酚，随着时间的变化这两组中SOD活力没有显著变化，环境剂量组中，SOD活力较低，说明水环境中壬基酚对中华新米虾SOD有抑制作用；在2倍环境剂量和5倍环境剂量中SOD活力随时间有显著下降趋势。而2倍环境剂量和5倍环境剂量中SOD活力明显高于环境剂量组，说明较高浓度的壬基酚又刺激SOD活力升高来抵御胁迫（见图1）。 壬基酚对中华新米虾胁迫实验中，空白组和酒精对照组，GST活力呈现先降低，10 h又上升的趋势，说明无胁迫酶活力可以恢复。而在环境剂量和2倍环境剂量GST活力下降明显，说明水环境中壬基酚对中华新米虾GST有抑制作用，在5倍环境剂量中，GST活力总体随时间也呈下降趋势，说明一定剂量的壬基酚对中华新米虾肌肉谷胱甘肽转移酶活性有胁迫作用，与对照组相比，差异显著。而5倍环境剂量明显高于环境剂量组和2倍环境剂量中GST活力，说明较高浓度的壬基酚又刺激GST活力升高来抵御胁迫，而刺激GST提高的浓度略高于刺激SOD提高的壬基酚浓度 （见图2）。 空白对照组MDA含量远远高于其他组（见图3），说明不同浓度的壬基酚对中华新米虾中的MDA都有较大影响。 3讨论 杨丽丽、方展强[3]的研究发现低浓度的壬基酚对唐鱼体内SOD的含量没有明显变化，但是高浓度的壬基酚使唐鱼体内的SOD含量明显上升。我们的实验结果表明中华新米虾在不高于5倍环境剂量的条件下，SOD的活力是下降的，这表明壬基酚对中华新米虾有一定的毒性作用，使其组织损伤，超氧化物歧化酶活力降低。在曹燕花，王茜对小白鼠的研究[4]有类似的发现，与对照组肝脏SOD的活力、MDA 含量的比较，没有明显差异。高剂量组与低剂量组肾脏SOD 活力、MDA 含量比较，差异显著（P＜005），随染毒NP浓度升高，SOD活力降低，MDA 含量升高。各剂量组子宫NOS 活力比较差异显著（P＜0.05），随染毒壬基酚浓度升高，NOS 活力下降。结论NP可导致雌性大鼠肾脏SOD 活力降低、MDA 含量升高，且导致子宫中NOS 活力降低，说明壬基酚对肾脏及子宫造成了氧化损伤作用，对肝脏无氧化损伤作用。由此也说明NP主要对生物的生殖系统造成伤害[5]。 GST作为动物体内一种重要的解毒酶，能敏感地感觉到环境中壬