山羊IFN-γ免疫血清制备及抗体ELISA检测方法的建立.pdfVIP

， ， （ ）： ２０１６ ３７ １２ ２４-２７ Ｐｒｏ ｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇ ｙ 山羊ＩＦＮ-γ免疫血清制备及抗体ＥＬＩＳＡ检测方法的建立 刘鹤媛，周 铭，岳进华，张洪杰，陈德坤* 　 （西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 ７１２１００） 摘 要：为制备山羊干扰素 （ ）免疫血清并建立山羊 抗体 检测方法，以原核表达的 - ＩＦＮ- ＩＦＮ- ＥＬＩＳＡ 　　 　 γ γ γ 山羊 重组蛋白（ ）为材料，免疫小鼠制备免疫血清；通过对测定不同的抗原包被浓度及包被时 γＩＦＮ ｒＩＦＮ-γ 间，酶标抗体稀释度，免疫血清的孵育时间等条件的优化建立检测抗体效价的 ＥＬＩＳＡ检测方法，并采用建立 的方法测定免疫血清的抗体效价。结果显示， 抗原包被浓度为 ／ ， 包被 ；酶标抗体 ｒＩＦＮ-γ １０ μｇ ｍＬ ４ ℃ １２ｈ 稀释度为 １∶５０００；免疫血清孵育时间为 ６０ｍｉｎ，可以得到最佳ＥＬＩＳＡ 的检测结果。重复试验显示该方法 变异系数（ ）在 之间。采用建立的方法测得免疫小鼠免疫血清效价为 ７ 。该 检测方 ＣＶ １．５％ ５％ １０ ＥＬＩＳＡ ～ 法灵敏高，稳定性好，为山羊ＩＦＮ-γ抗体检测提供了技术支持。 关键词：山羊； ；免疫血清；酶联免疫吸附试验 　　 ｒＩＦＮ-γ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．４ Ａ １００７-５０３８ ２０１６ １２-００２４-０４ 干扰素（ ）是一种重要的细胞因子，主要 剂为 公司产品；羊抗小鼠 酶标抗体为北 　　γ ＩＦＮ-γ Ｓｉ ｍａ Ｉ Ｇ ｇ ｇ 参与细胞免疫［］１ 。病毒、细胞内寄生菌等病原体入 京博奥森生物公司产品； 显色液为天根生化科 ＴＭＢ ［］２ ［］３ 技（北京）有限公司产品；酶标仪为 公司产 侵机体 ，或肿瘤细胞的产生 ，都会刺激机体产生 Ｂｉｏ-Ｒａｄ ，诱导巨噬细胞、 细胞、 细胞等细胞 品；酶标板为 Ｃａｓｔｏｒ公司产品；其他试剂为进口或 ＩＦＮ-γ Ｔ Ｂ ＭＨＣ 类分子的表达，提高抗原递呈能力； 也能活 国产分析纯。 Ⅱ ＩＦＮ-γ １．２ 方法 化巨噬细胞、 细胞等，提高其对病原体的杀伤能 　 ＮＫ