山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌双重 PCR 检测方法的建立.pdfVIP

， ， （ ）： ２０ １ ４ ３ ５ １ ２ １ ０１ ３ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌 双重ＰＣＲ 检测方法的建立 亢宁宁，刀筱芳，冯旭飞，虎 啸，马晓楠，杨发龙 　 （西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 ６ １ ００４１ ） 摘 要：为建立一种能够同时检测山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌的双重ＰＣＲ 方法，本研 　　 　 究采用 对特异性引物，对退火温度和引物浓度比进行了优化，成功建立了一种能同时检测上述两种病原的 ２ 双重ＰＣＲ 方法。结果显示，该方法具有很好的特异性，仅对山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌有 扩增，而对其他常见的羊呼吸道病原无扩增；该方法对两种病原的检测限分别为 ３２ ｐｇ 和５０ ｐｇ ，与单独ＰＣＲ 相同； 份临床样品中山羊支原体山羊肺炎亚种的检出率为 ，多杀性巴氏杆菌的检出率为 。 ２ ６ ２３ ．１ ％ ２ ６ ．９ ％ 所建立的双重ＰＣＲ 具有特异性好、灵敏度高的特点，为临床上这两种病原感染的快速诊断和流行病学调查 等提供了更为有用的手段。 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种；多杀性巴氏杆菌；双重ＰＣＲ 　　 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５ ２ ．６２ Ａ １ ００７５０３８ ２０ １ ４ １ ２００ １ ００４ ［ ， ］ 呼吸道疾病是影响山羊养殖业的重要疾病之 染的诊断 ６ １ １ 。由于山羊支原体山羊肺炎亚种和多 　　 一，主要引起山羊群体性发病、死亡或生产性能下 杀性巴氏杆菌均可引起山羊肺炎，且可以混合感染， 降，给山羊养殖户造成了严重的经济损失。其中，山 因此有必要建立一种能够同时检测该两种病原的双 羊支原体山羊肺炎亚种（ 重 方法，从而为生产中快速、准确检测这两种 Ｍｙ ｃｏｐ ｌａｓｍａ ｃａｐｒｉｃｏｌｕｍ ＰＣＲ ， ）可引起山羊传染性 病原及其感染的鉴别诊断和流行病学调查提供一种 ｓｕｂｓｐ．ｃａｐｒｉｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｍｃｃｐ 胸膜肺炎，该病以严重的纤维素性胸膜肺炎为主要 新手段。 特性，是一种高度传染性、致死性的山羊呼吸道传染 １ 材料与方法 ［ ］ 　 病，发病率可达到 １ ００ ％ １２ ，该病在我国青海、甘肃 １ ．１ 材料 ［ ］ 　 ３５ 等地发生并广泛流行 ，近年报道其可引起藏羚羊 １ ．１ ．１ 菌株及临床样品 丝状支原体山羊亚种 Ｙ ［ ］ 　 　 ６ 的胸膜肺炎 。多杀性巴氏杆菌（ Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌ