山羊毛囊外根鞘细胞系的建立.pdfVIP

动物营养学报2016,28(10):3207-3216 ChineseJournal of AnimalNutrition 　 doi:10.3969/ j.issn.1006-267x.2016.10.024 山羊毛囊外根鞘细胞系的建立 1 1∗ 1 2 2 崔志峰 　 于会国 　 张　 忠 　 王　 慧 　 曾勇庆 (1.山东科技职业学院,潍坊 261053;2.山东农业大学动物科技学院,泰安 271018) 摘　 要: 本试验旨在建立纯一、稳定的山羊毛囊外根鞘细胞系。 活体采集济宁青山羊羔羊背部 皮肤,采用机械分离与酶消化相结合的方法,分离外根鞘细胞,培养于含有表皮生长因子 - (EGF)、类胰岛素生长因子 Ⅰ(IGF-Ⅰ)和氢化可的松的无血清角质细胞培养液中,置5% CO2 浓度的37 ℃培养箱中启动原代培养。 待原代细胞长成良好的单层后即可进行传代培养,细胞 经传代培养至第8~10代时,更换含EGF、IGF-Ⅰ、氢化可的松和 FBS 的DMEM/ F12 培养液进 行长期培养。 选取传至第40代的外根鞘细胞进行生长特性研究与染色体分析。 结果表明:体 外培养的细胞倍增时间为51.9 h,培 = 养细胞的染色体数仍以2n 60 为主,但是出现了非整倍体 性染色体特征;免疫细胞化学鉴定结果表明,该细胞系角蛋白19 表达呈阳性。 结果提示,本试 验分离培养的细胞确为由山羊毛囊干细胞分化来的外根鞘细胞,体外培养的山羊毛囊外根鞘细 胞系得到了成功建立。 关键词: 毛囊外根鞘细胞;细胞系;济宁青山羊;生长特性;染色体数目 中图分类号:S826　 　 　 　 文献标识码:A　 　 　 　 文章编号:1006-267X(2016)10-3207-10 　 　 毛囊(hair follicle)是表皮向真皮凹陷后形成 毛囊周围便可游离出外根鞘细胞,但该方法获得 的能控制毛发生长的皮肤附属器官,具有独特的 的外根鞘细胞产量低且再生能力差,不便于进行 结构、合成多种特异角质蛋白的功能以及周期性 进一步的研究与大量的应用。 迄今,已有多种细 再生的能力。 毛囊在形成与分化过程中至少涉及 胞分离技术和细胞培养方法运用于外根鞘细胞的 到20余种不同的细胞群,主要由毛乳头、毛母质、 体外培养,其中,较为常用的培养方法有 2 种:一 - [1 2] 内根鞘和外根鞘等细胞组成 。 其中,外根鞘细 种是将分离的毛囊经胰蛋白酶消化处理后,用含 胞(outer root sheath cell,ORSC)作为一种重要的 10% 胎 牛 血 清 (fetal bovine serum,FBS) 的 毛囊上皮细胞,因具有高度增生的潜能,在毛发再 DMEM/ F12培养液制成细胞悬液,然后接种于经 生、伤口愈合、初级毛囊和次级毛囊分化等生理过 丝裂霉素处理的3T3 细胞滋养层上,37 ℃、5% - 程中均起着重要作用而越来越受到关注。 [5 8] CO 条件下进行原代培养 ;另一种则是利用胶 2