病小麦一中间堰麦草染色体异附加系.PDF

遗 传 学 报，26(0:49-53,1999 ActaGenedca Sinica 应用原位杂交及RAPD技术标记抗黄矮 病小麦一中间堰麦草染色体异附加系 徐琼芳 马有志 辛志勇 陈 孝 林志珊 （中国农业科学院作物所 农业部作物遗传育种重点开放实骑室 北京 100081) 摘要 以生物素 B（iotin-16-dUTP）标记中间堰麦草基因组DNA为探针，与抗黄矮病小麦一中 间堰麦草染色体异附加系Z。进行原位杂交，鉴定出附加的1对中间堰麦草染色体。对异附加 系Z6和L．及它们的小麦亲本进行了RAPD分析，从120个随机引物中，筛选出2个引物可以 扩增出附加染色体的特异DNA片段，可作为鉴定导人小麦的中间堰麦草染色质的分子标记。 关键词 异附加系，原位杂交，RAPD，分子标记 分类号 Q343 中间堰麦草T（hinopyrumintermedium,2n二42)染色体异附加系z6是通过普通小麦 与小麦一中间堰麦草部分双二倍体无芒中4(2n=56)杂交、回交选育出的二体异附加系 (2n=44)It]。高抗大麦黄矮病毒b（arleyyellowdwarfvirus,BYDV)。由于Z。的小麦亲 本中8423不抗BYDV，说明Z。的抗BYDV基因是来自附加的中间堰麦草染色体。同工酶 及RFLP分析结果证实Z。的外源染色体属第二部分同源群染色体，并被定名为2Ai-2染 色体[a1.Cauderon等[31［从小麦一中间堰麦草部分双二倍体TAF46(2n-=56）中选育出抗 BYDV异附加系L3。研究表明，LI携带的外源染色体属第七部分同源群，并被命名为 7Ai-1染色体4[-［61。辛志勇等7[1已成功地将L，的抗BYDV基因导人小麦，获得抗BYDV小 麦种质。Larkin等[21的研究证实，TAF46与无芒中4分别携带着不同的抗BYDV基因。特 别是无芒中4携带的抗BYDV基因对在我国流行的GPV株系具有极好的抗性，将成为我 国选育抗BYDV小麦品种的又一重要抗源9[1。因此，对Z6,.L1携带的外源染色体进行标 记、鉴定，不仅有助于应用细胞工程分别将两种抗BYDV基因导人小麦品种，创造抗 BYDV小麦新种质，同时也可为实现抗性基因累积提供选择标记。 原位杂交 in（situhybridization)技术是利用标记的DNA作为探针，与染色体DNA进 行分子杂交，直接检测与探针互补的DNA顺序的存在位置。它是在分子水平上鉴定识别 染色体的有效方法。特别是基因组原位杂交g（enomicinsituhybridization,GISH）已广泛 应用于染色体组型分析和外源染色体鉴定。RAPD技术是以一个随机的寡聚核昔酸链 (10饰）为引物，以基因组DNA为模板进行PCRDNA扩增，进而检测扩增产物的多态性。 近年来RAPD技术广泛应用于品种鉴定、基因标记等。 本文于1997-01-21收到，1997-06-28修回 国家 8“63”计划”及国家自然科学基金资助项目 50 遗 传 学 报 26卷 本文报道了采用GISH法对Z6，应用RAPD技术对Z(,L，的中间堰麦草染色体及来 自L，的抗BYDV易位系中的中间堰麦草染色体片段进行鉴定、标记的结果。 l材料和方法 1.1实验材料 无芒中4、中间堰麦草、Z。及其普通小麦亲本中8423,L，普通小麦亲本Vilmorin27, 来自L，的抗BYDV的小麦易位系Y95011(2n=42)、普通小麦品种中国春。 1.2 DNA提取 参照 《分子克隆》。 1.3 RAPD分析 PCRDNA扩增反应在25p1混合液中进行，其中模板DNA50ng,MgCl21.5mmolI L,dNTP0.1mmol/L,TagDNApolymerase1U.随机引物O（peron公司产pp)0.2pmol L.45个循环，每个循环的条件分别是：95Cl5s,370CSs,72C ]min。扩增产物在1.5％琼 脂糖凝胶上电泳，共检测了120个引物，每个引物都重复3次以上。 1.4 原位杂交 以生物素 B（iotin-16-dUTP）标记中间堰麦草基因组DNA作为探针，以中国春基因组 DNA为封阻DNA，与异附加系Z。的中期染色体DNA进行了原位杂交。 1.4.1探针的制备 按随机引物法标记探