PP2AB56β全酶调控重金属诱导细胞毒性的作用研究.PDF

基础研究 稿件编号：ZHYF-2014-0917-01132 编辑：燕纪法 郑湃 占 6 面 蛋白磷酸酶2A B56β全酶调控氯化镉诱导肝细胞毒性的作用研究 张劲苗 马璐 王珊 陈雯 陈丽萍 DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2015.05.0 基金项目：国家自然科学基金；广东省自然科学基金（S2013020012725） 作者单位：510080 广州，中山大学公共卫生学院预防医学系 通信作者：陈丽萍，Email: chenliping_happy06@163.com 【摘要】目的 探讨蛋白磷酸酶2A （protein phosphatase 2A, PP2A）B56β全酶调控 CdCl 诱导肝细胞毒性的作用及其机制。方法 采用改良四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测 2 CdCl 对人正常肝细胞L-02、黄曲霉素诱导转化细胞 （L-02RT-AFB）及肝肿瘤细胞Bel7402 2 1 的毒性，利用病毒感染法在L-02或Bel7402上构建AKT低表达(L-02SHAKT)、B56β低表达 (L-02SHB56β)和B56β高表达(L-02RT-AFB-B56β、Bel7402-B56β)的细胞株。在浓度为1 0、20、40、80、160 μmol/L 的CdCl 处理下，检测人正常肝细胞L-02、转化的肝细胞和2 肝肿瘤细胞的相对细胞活力。在2.5、5 μmol/L 的渥青霉素和40 μmol/L CdCl 共同作用2 下检测L-02细胞中各蛋白相对表达量。采用Western blot法检测这些细胞株中B56β、金 属硫蛋白 （metallothionein，MT）、AKT、AKT磷酸化的表达水平。结 在40 μmol/LCdCl2 作用下，L-02 RT-AFB 和Bel7402细胞中MT表达水平分别为0.12±0.02、0.06±0.06，低1 于对照细胞L-02 （0.92±0.14）（F=1 148.16，P0.001）。在40 μmol/LCdCl 作用下，AKT2 干扰细胞株L-02 SHAKT-1、L-02 SHAKT-2 中p-AKT水平分别为0.08±0.02、0.08±0.05， 低于对照细胞L-02 SHGFP （0.18±0.15）（F=724.70，P0.001）；两种细胞MT 的表达水平 均为0.62±0.16，高于对照细胞L-02 SHGFP （0.22±0.14）（F=94.73，P0.001）。在2.5、 5 μmol/L渥青霉素和40 μmol/L CdCl 共同作用下，L-02细胞中p-AKT 的表达水平分别2 为0.28±0.07、0.15±0.11，低于未用渥青霉素处理组（0.52±0.11）（F=578.57，P0.001）； MT 的表达水平分别为1.62±0.80、1.08±0.15，高于未用渥青霉素处理组（0.69±0.18） （F=12.34，P0.001）。在40 μmol/L CdCl 作用下，B56β低表达细胞株L-02 SHB56β-1、2 L-02SHB56β-2 中p-AKT 的表达水平分别为0.57±0.13、0.59±0.02，高于对照细胞L-02 SHGFP （0.32±0.02）（F=87.16，P0.001）；MT 的表达水平分别为0.35±0.07、0.20±0.03， 低于对照细胞L-02 SHGFP （1.51±0.13）（F=2 457.10，P0.001）。在40 μmol/L CdCl2 作用下，B56β高表达细胞株L-02RT-AFB-B56β、Bel7402-B56β中p-AKT 的表达水平分别1 为 0.10±0.11、0.09±0.01，低于对照细胞 L-02 RT-AFB （0.36±0.01）、Bel74021 （0.43±0.11）（F=877.62，P0.001）；MT 的表达水平分别为0.92±0.13、0.95±0.08，高 于对照细胞L-02RT-AFB （0.44±0.12）、Bel7402 （0.77±0.06）（F=51.97，P0.001）。结1 论 特异的PP2AB56β全酶介导AKT的去磷酸化水平可调控MT的表达，最终影响重金属CdCl2 诱导的肝细胞毒性。本研究揭示了一条PP2A参与CdCl 诱导肝细胞毒