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缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响
缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA
甲基化的影响 郭芮伶1，吴国明
（1. 解放军第324医院，重庆，400020；
2. 第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037）
【摘要】 目的：研究缺氧对人小细胞肺癌H446细胞基因组DNA甲基化水平的影响。方法： 体外培养人小细胞肺癌细胞H446，置于缺氧（3%O2）条件下培养，分别于0 h、12 h、24 h、48 h、72 h后提取细胞基因组DNA，用甲基化敏感性随机引物PCR（MS-AP-PCR）方法检测基因组DNA甲基化。结果：缺氧H446细胞DNA甲基化水平。结论：缺氧可能是造成细胞内甲基化失衡的原因之一。
【关键词】? 缺氧人小细胞肺癌基因组DNA甲基化
Effect of hypoxia on genomic DNA methylation level human small-cell lung cancer cells H446
GUO Rui ling1, WU Guo ming2, JI Fu yun2, LI Hai dong1, Li Wen bi1, Pan Feng1
( 1. Respiratory Department, PLA 324 Hospital, Chongqing 400020；
2. Institude of Respiratory Research, Xingqiao Hospital,
Third Military Medical University, Chongqing 400037
?Abstract? Objective: To investigate? the influence on the methylation level of genomic DNA? caused by hypoxia in human small cell lung cancer cells H446. Methods: H446 cells were cultured under the hypoxic condition(3%O2）0 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h ). The genomic DNA methylation level was detected by MA-AS-PCR after DNA extraction. Results: Compared with the nomixic control group, the quantity and fluorescence intensity of amplified products of hypoxic experimental group were much higher, especially after 24h. This means the genomic DNA methylation level of H446 cell significantly changed when cell was treated by hypixia, mainly representing multifocal hymethylation.?Conclusion: Hypixia might be one of the key forces induced cancer cells with unbalanced methylation.
Key words: hypoxia; human small-cell lung cancer;?genomic DNA; aberrant methylation
Supported by the Foundation of the Medical Science Research of Chengdu Military Area Command(MB09010).Corresponding author: Wu Guoming, Tel: 86-23 E-mail: guomingwu@
【基金项目】成都军区医学科研计划课题基金（编号MB09010）。
【通信作者】吴国明，电话（023-mail：guomingwu@ 日益增多的证据表明，除遗传异常外，肿瘤细胞同时受累于多种表观遗传学机制缺陷导致DNA甲基化模式改变的机制不清楚为探明缺氧对肿瘤细胞基因组甲基化水平有无影响，本文以人小细胞肺癌细胞为例对此进行了初步研究。
1? 材料和方法
1.1? 主要材料和试剂 ????? ?人小细胞肺癌细胞株H446由第三军医大学新桥医院呼吸研究所馈赠，RPMI-1640培养基及小牛血清购自Gibco公司；提取基因组DNA试剂为国产分析纯，自行配制
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