Bmi-1 shRNA抑制膀胱癌5637细胞增殖和侵袭转移的机制研究.pdfVIP

中文摘要 Bmi一1 究 摘 要 侵袭及转移的影响，探讨膀胱癌早期诊断、肿瘤分级和预后的分子标志物， 及基因治疗的可行方案。 方法： 1．构建Bmi．1 mRNA(NM005 GenBank中Bmi．1 180)序列，合成针对Bmi．1核心编 靶向的核苷酸片段及一组错义序列。合成的发卡DNA退火、纯化后和线 筛选重组体，Pst I酶切鉴定阳性重组子，提取质粒进行DNA序列分析， 1、 复苏、培养、传代，实验分为4组：(1)未转染组(正常对照组)；(2) 1组(干扰 H．T．H．T结构)。 Bmi．1环指结构)；(4)pGeneClipTM．B2组(干扰Bmi．1 Transfection 将重组质粒按CodeBreakerTMsiRNA Reagent操作方法转染 5637细胞。 增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Transwell侵袭实验检测细胞 的侵袭能力，细胞划痕试验检测细胞迁移能力。 4．统计方法：计量资料用(z q-SD)表示，各种结果的差异应用 SPSSl3．0软件统计分析。 结果： 中文摘要 质粒pGeneClipTM．B．neg，PstI酶切鉴定分析，质粒B1、B2和B．neg均 符合实验设计要求。 2．shRNA抑制Bmi．1 l和 B2组Bmi．1 mRNA和蛋白的表达均明显低于B—neg组和未转染组(P 0．05)；B．neg组和未转染组之间差异无统计学意义(PO．05)。 3．MTT法检测细胞增殖活性，B1和B2组细胞生长受到明显抑制(P 0．05)，而B-neg组与未转染组细胞生长无明显影响(尸O．05)。 4．流式细胞术检测细胞凋亡，B1和B2组细胞凋亡率分别为 3+0．1 (19．83+0．17)％和(27．33士0．15)％，与未转染组(7．11)％和B—neg组 (6．70a：0．13)％相比，B1和B2组细胞凋亡率明显增加(尸O．05)。 差异均有统计学意义(PO．05)。 6．细胞划痕实验检测迁移能力，B1、B2组划痕48h后融合趋势仍不 明显，未转染组和B．neg对照组两侧细胞大部分已接近融合。 结论： 均可以有效抑制Bmi．1mRNA和蛋白的表达。 2．Bmi．1 shRNA可以抑制膀胱癌5637细胞的增殖、侵袭及转移。 英文摘要 onMechanismofBmi—I Cell Investigation shRNA Inhibiting and ofBladder5637 Proliferation，Invasion Cancer Migration