Bmi-1通过抑制INK4A-ARF靶点促进胰腺癌发生的实验探究.pdfVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 摘 要 目 的：探讨运用RNAi 技术沉默Bmi-1 基因对人胰腺癌细胞恶性行为的影响，为 胰腺癌基因治疗提供新的靶点和思路。 方 法：构建反义Bmi-1 真核表达载体转染人胰腺癌PANC-1 细胞，运用MTT 、荧 光显微镜下观察、Western-Blot 等技术检测转染效果；运用流式细胞术检测细胞周期、 凋亡变化；RT-PCR 检测P16INK4A 表达变化；甲基化特异性PCR 检测P16INK4A 启 动子甲基化变化。 结 果：（1）成功构建反义Bmi-1 真核表达载体并且转染效率较高、效果明显。（2 ） 转染后细胞周期出现阻滞，凋亡明显增加。（3 ）转染后P16INK4A 表达上升其启动子 甲基化程度下降。 结 论：Bmi-1 可作为胰腺癌基因治疗的靶点，Bmi-1 可能是通过影响启动子甲基 化而实现对P16INK4A 表达的调控。 关 键 词: 胰腺癌；Bmi-1 ；P16INK4A ；甲基化；流式细胞术 2 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 Abstract Objective: To establish the effect knocking down Bmi-1 bring to pancreatic cancer cells for gene therapy of pancreatic cancer Methods: Construction of antisense Bmi-1 vector transfected into human pancreatic cancer PANC-1. using MTT, fluorescence microscopy observation, Western-Blot techniques to assay results; using flow cytometry to study cell cycle and apoptosis ; RT-PCR was used to study P16INK4A expression; the promoter methylation changes of P16INK4A. was demonstrated by methylation-specific PCR Results: (1) successfully constructed antisense Bmi-1 vector and high transfection efficiency. (2) transfected cell cycle arrest, apoptosis increased significantly. (3) the P16INK4A expression of transfected cells increased and the promoter methylation of its declined. Conclusions: Bmi-1 could serve as targets for gene therapy of pancreatic cancer, the expression of P16INK4A may be affected by Bmi-1 via promoting the promoter methylation of P16INK4A. Key words: pancreatic cancer; Bmi-1; P16INK4A; methylation; flow cytometry 3 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 前 言 肿瘤的发生发展是多种因素下致原