BMP-7在慢性肺疾病新生鼠的表达和对肺成纤维细胞作用的研究.pdfVIP

目录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………6 二、英文缩略语………………………………………………………………………12 三、论文 前‘言……………………………………………………………………………13只U舌……………………………………………………………………………13 材料与方法……………………………………………………………………14 实验结果………………………………………………………………………20 讨论……………………………………………………………………………34 结论……………………………………………………………………………38 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………39 五、参考文献………………………………………………………………………40 六、附录 综述……………………………………………………………………………43 致谓十…………………·………………………………………………………··54 个人简介………………………………………………………………………55 ·中文论著摘要· BMP．7在慢性肺疾病新生鼠的表达及对肺成 纤维细胞作用的研究 莉 青 早产儿慢性肺疾病(ChronicLungDisease，CLD)是早产儿在肺发育未成熟的基 础上，因高氧、感染、气压伤等原因引起肺部的远期合并症。近年来，随着产科 技术的逐渐提高、机械通气的普遍开展及肺表面活性物质的广泛使用，使得极低 或超低出生体重儿存活率在不断提高，也使CLD的发生呈上升趋势，严重影响新 生几的生存质量。因此，探索CLD肺纤维化的发生机制及寻找有效的防治方法是 目前新生儿领域的热点研究之一。 大量研究结果表明，高浓度氧是诱发早产JhCLD的最主要原因和最危险因素。 吸入高浓度氧气后，引起肺部氧化应激反应。大量的细胞因子参与高氧引发的炎 症反应，直接引起或加重肺损伤。其中转化生长因子-131(Transforminggrowth 炎发生和肺纤维化过程中具有重要作用，而且能诱导肺脏高水平表达结缔组织生 长因子，加快肺纤维化的发生。但与TGF．131同属于TGF．13超家族成员的骨形态发 生蛋白一7(bone morphogeneticprotein，BMP一7)在肺损伤中的作用研究较少，有研 究证实：BMP．7与拮抗纤维化作用密切相关，BMP．7可能在拮抗器官(肝脏，肾 脏，心脏)纤维化中发挥重要的作用。但其在高氧致早产)LCLDJ]巾纤维化中的作 用及机制尚不清楚，因此探讨BMP．7在CLD中的作用，可能为寻求早产)LCLD的 有效防治措施奠定基础。 本研究以高氧诱导的新生鼠CLD模型及原代培养的肺成纤维细胞为对象， 通过RealTimePCR分子生物学技术、流式细胞术等技术，动态观察肺组织中 BMP．7的表达规律及与肺纤维化的关系，并试图通过BMP．7作用原代培养的新 生鼠肺成纤维细胞的体外实验，阐明BMP．7对成纤维细胞增殖及细胞周期的影 响。 材料与方法 一、动物实验部分 (一)实验动物 足月新生Wistar大鼠80只，体重5-9克，雌雄不限，随机分为实验组(高氧 组)和对照组(空气组)，每组40只。 (二)动物模型的制备 参照我们已报道的方法制备高氧诱导新生鼠CLD模型。实验组将足月新生的 Wistar大鼠生后即置于氧箱中，持续输入氧气，维持氧浓度为0．90，用钠石灰吸 时，添加水、饲料及更换垫料，并每天与对照组交换代母鼠，以避免因氧中毒而 致喂养能力下降。对照组吸入空气，具体方法及控制因素同实验组。 (三)标本的采集和检测指标 每组分别于实验后的3，7，14和21天随机选取10只麻醉后处死，分离肺组织。 将左肺组织置于4％多聚甲醛中固定，应用HE染色方法进行肺组织病理改变观察， 应用免疫组织化学技术进行肺组织BMP．7蛋白表达的检测。其余肺组织于一80。C冰 Time 箱中冻存，应用Real PCR分子生物学技术进行BMP．7mRNA表