BMSCs移植促进脊髓损伤后神经功能恢复作用的实验探究.pdfVIP

中文摘要 BMSCs移植促进脊髓损伤后神经功能恢复作用的实验研究 摘 要 目的：随着社会发展及交通工具的进步，高处坠落伤或车祸伤所致 cord 的脊髓损伤(spinainjury,sct)已经成为危害人类健康的常见病。其给 人们带来了沉重的经济负担和精神压力。现在临床上的治疗手段所取得的 效果有限，患者仍然不同程度出现了严重并发症及后遗症。近年来，干细 胞的介入治疗SCI成为方兴未艾的研究热点。干细胞(stemcells，SCs)，是 指既有保持多向分化为各种细胞的能力，又有自我更新能力的细胞，许多 组织和胚胎等都有存在SCs。其多向分化能力可以“不对称分裂产生除其 自身以外的细胞”，可分为胚胎干细胞和成体干细胞，其中成体干细胞主 stem 要包括有间充质干细胞(mesenchymalcells，MSCs)、神经干细胞，脂 marrow 肪干细胞，肌源性干细胞等。其中骨髓来源的MSCs(bone stem mesenchymalcells，BMSCs)，即骨髓间充质干细胞，是最新研究的一 个热点。其具有来源广泛，培养分离简单，经济实用性，低免疫原性，多 向分化性及遗传性状稳定等，成为干细胞研究的首选种子细胞之一，另外 BMSCs可显示神经细胞的一些形态特征和表达一些标志性蛋白，这为多 种神经系统疾病的治疗提供了新思路。不可否认的是BMSCs治疗脊髓损 伤的机制并没有统一的结论。 在动物实验研究中一直存在不能活体动态检测移植干细胞的困难，而 随着分子影像学(molecular resonance imaging，Mm)的出现，由于其理论上可以达到提供理想的分辨率 (单个细胞水平)，而这使得借助MRI对比剂使对干细胞的活体动态检测 成为现实。目前应用的MRI对比剂主要有两种：①主要产生T1正性对比 以单晶体或多晶体氧化铁为基础的铁类对比剂，目前多是以超顺磁性氧化 iron oxide，SPIO)为代表。因为其具有对外加磁场高度 铁(superparamagnetic 敏感性，理论上实现了SPIO标记的单个干细胞就可以被检测出来，故而 被多数实验研究所采用。SPIO标记的干细胞在外加磁场的作用下呈现T2 中文摘要 所可能起到的作用等方面，并为以后进一步深入研究关于如何妥善解决 BMSCs定向分化问题和可能随时间延长而逐渐减弱的分化能力；如何进 一步研究相关信号转导通路在轴突再生中所形成功能性桥接的机制；如何 明确分化的神经样细胞能起神经元细胞作用等课题做好基础性研究。 方法：体外行BMSCs培养，联合应用SPIO及多聚左旋赖氨酸 兔40只是，随机分为2组(A组：脊髓损伤组；B组：细胞移植组，即脊 髓损伤后7天后行BMSCs移植)，A组行T9水平的椎管切开暴露硬脊膜 脊髓损伤模型的制作，留观察对照用。B组脊髓模型制作完成后7天，于 T9脊髓损伤节段上、下位0．5 cm处用5ul微量注射器以与损伤脊髓水平 面呈30度角刺入脊髓组织1．5Hun，停针约1min后，匀速缓慢注入2ul BMSCs悬液，明胶海绵覆盖硬脊膜并逐层缝合切口至皮肤。术后1W、 察，统计学积分分析采用SPSSll．0软件，所有数据用均数±标准差 5W行3．0TMR检查，术后7W时行脊髓石蜡包埋，病理组织切片及HE 染色观察组织形态学。 结果： (1)3．0MRI显示，干细胞移植组在移植干细胞当天的移植处，借助梯度 回波序列(GRE)T*2WI序列呈低信号影，第14天时GRET*2WI序列 显示低信号向损伤区迁移， 5W行为学积分显示A组与B组运动功能均有不同恢复，但A组恢复慢， 且有限，组间行为学积分有统计学意义(po．05)。 (3)术后7W脊髓石蜡切片行HE染色，A组脊髓组织破坏严重，伴有 广泛的神经元变性和由液化坏死形成的空腔，并呈“破网状’’改变；B组 脊髓破坏较轻，有部分神经元变性及仅形成较小的空腔，中间可见