BMSCs移植对慢性脑缺血大鼠认知功能和Nogo-A、NgR表达的影响.pdfVIP

摘要 研究生：王燕琳 导师：许予明教授 中文摘要 慢性脑缺血是由于各种因素造成颈内动脉系统或椎一基底动脉系统血管痉挛、狭窄、 闭塞，脑部长期血流灌注不足，引起组织缺血缺氧，导致神经功能受损，认知功能障碍。 神经损伤后继发一系列病理生理变化导致大量轴突再生抑制蛋白释放，不利于神经功能恢 复。Nogo—A是目前已知的最强的轴突再生抑制蛋白，在髓鞘损伤后具有强烈的抑制轴突生 长作用，NgR是其受体，介导神经生长抑制作用，是影响神经修复的重要通路。有研究表 明大鼠脑缺血缺氧后Nogo-A和NgR蛋白表达均增高，强烈抑制神经纤维的再生与联系， 导致神经能力的减退。骨髓间充质干细胞(BMSCs)是一种具有多向分化潜能的干细胞， 来源广泛，易于采集、制备及保存，避免了免疫排斥反应，又可通过自体移植，且不涉及社 会、伦理及法律等问题，具有广泛的临床应用前景。有研究表明骨髓间充质干细胞移植可 通过降低脊髓损伤模型及脑梗塞模型大鼠的Nogo—A及NgR的表达，从而减轻神经损伤。 此外，研究表明BMSCs可改善慢性脑缺血模型大鼠的认知障碍，但其改善认知状态是否与 Nogo-h及NgR的表达下调有关尚未清楚。 本实验拟通过双侧颈总动脉永久结扎法建立慢性脑缺血模型，通过BMSCs移植观察大 鼠的学习与记忆能力的变化，经免疫组织化学染色检测大鼠海马区Nogo—A及NgR蛋白的 表达变化，探讨BMSCs移植促进慢性脑缺血大鼠认知功能恢复的机制。 目的： 研究BMSCs移植对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响，并通过观察慢性脑缺血大鼠海 马区Nogo-A及NgR蛋白的表达探讨其机制。 方法： 采用双侧颈总动脉永久结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型，FICOLL密度梯度离心法与 摘要 探索试验，记录其逃避潜伏期及跨越平台次数，检测空间学习与记忆能力的差异，HE染色 观察各组海马区神经细胞数量、结构、排列的差异，免疫荧光染色检测移植组海马区BMSC 迁移及存活情况，免疫组织化学染色检测各组海马区Nogo—A及NgR蛋白的表达。 结果： 1 BMSCs流式细胞鉴定结果 阳性率为97．8％CD34及CD45阴性率为100％，可见其纯度较高， 2 Morris水迷宫进行行为学实验结果 模型组大鼠及移植组大鼠在定向航行试验和空间探索试验中与假手术组大鼠比较均 相比明显减少(PO．01)； 3病理表现 模型组海马区组织HE染色结果显示锥形细胞排列错乱，甚至断裂呈线状，原有结构 破坏，大量细胞凋亡坏死及空泡形成，移植组海马区锥形细胞排列较乱，但也可见大量核 深染及空泡形成，假手术组细胞排列正常，在病理结构上可见造模成功。移植组海马组织 中观察到Brdu荧光染色阳性的BMSCs能向脑缺血受损部位迁移、募集、存活。 4各组海马CAl区Nogo—A及NgR免疫组织化学染色结果 及(115．62±4．45)；无论是模型组还是移植组， 度值与假手术组相比都增加，组间比较具有统计学意义(PO．01)，移植组海马组织中 Nogo—A及NgR蛋白阳性细胞光灰度值均较模型组明显降低(PO．01)。 结论： 摘要 lBMSCs移植具有保护慢性脑缺血大鼠空间学习与记忆能力的作用， 2BMSCs的保护作用可能与降低Nogo—A及NgR蛋白表达有关 关键词： BMSCs慢性脑缺血Nogo-ANgR 认知功能 摘要 ofbonemarrqma eno,inowoderivedderivedrstromalstromalhceli!cellsctochronic Transplantation cerebralischemiaratsthe on influenceof functionand cognitive