BMP-2、FGF-2对大鼠触须毛乳头细胞增殖及毛发诱导能力的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 能力的影响 ．■‘-!， 刖 昌 近年来，脱发患者日益增多，它虽然不是致命性疾病，但给患者心理和日常 生活交际带来的困扰是不可忽略的。临床上对于脱发的治疗历来都是医生所面对 的棘手问题，并且疗效难尽人意。为克服这些困难，有学者提出毛囊细胞移植 (follicularcell 入脱发区来实现治疗目的。毛囊主要由表皮和真皮两种细胞成分组成，分别为上 皮源性和间充质源性，两者通过相互间的信号传导调节着毛囊的形成、生长发育 和周期性生长。其中，毛乳头细胞作为毛囊的真皮组分，在表皮和真皮的复杂信 号联系中起着主导作用。故毛乳头细胞可以作为脱发细胞治疗的一个重要细胞来 源，已有学者实验证实了将毛乳头细胞单独或联合其它毛囊相关细胞植入无毛区， 可诱导毛囊和毛发的再生。 毛乳头在毛囊内的位置隐蔽，这给体外分离带来很多困难，目前主要有显微 机械分离法、酶分法和采用流式细胞仪技术分离毛乳头细胞三种分离方法，各有 利弊。 毛乳头细胞的鉴定可以通过其表达的一些特征性的分子实现，其中检测碱性 磷酸酶活性最为普遍，它还可以作为毛乳头诱导毛发生长能力的评价指标，体内 试验已证实了碱性磷酸酶与毛乳头细胞诱导毛发生长能力呈线性相关。 体外培养的毛乳头细胞生长缓慢，并且其毛发诱导能力也会随着传代次数增 多而下降，这限制了毛囊细胞疗法的推广应用。因毛乳头的生长和诱导毛发生长 的能力有赖于所处环境中各种分子的调控，故推测在体外培养体系中，外源补给 这些因子或是增强它们的内源产生有助于促进毛乳头细胞的生长及其诱导毛发生 长能力的保持。有学者提出骨形成蛋白(Bone morphogeneticproteins，BMP)可以 显著增加毛乳头细胞内碱性磷酸酶的表达，当敲除毛乳头细胞内的骨形成蛋白受 体后，碱性磷酸酶的表达及毛乳头诱导毛发生长的能力均消失，说明骨形成蛋白 对毛乳头的诱导毛发生长能力有促进作用。也有学者提出在培养体系内加入成纤 factor 维细胞生长因子．2(fibroblast basic。FGF．2)可抵消毛乳头细胞体外增 growth 殖缓慢的作用。 毛乳头细胞可分泌胰岛素样生长因子(Insulin-likefactor-1，IGF．1)， growth 它可促进毛囊上皮细胞的增生和迁移等，进而促进毛发的再生，因此在众多的促 进毛发再生和生长的实验中，胰岛素样生长因子．1常被作为检测指标。 本研究以大鼠触须毛乳头细胞为研究对象，探讨骨形成蛋白．2和成纤维细胞 生长因子．2单独及联合作用对毛乳头细胞增殖和毛发诱导能力的影响，以及骨形 成蛋白．2是否通过胰岛素样生长因子．1促进毛发再生。 方法 1、采用显微机械分离法对大鼠触须毛乳头进行分离，组织块培养法进行毛乳 一 头细胞的原代培养． 2、以单克隆碱性磷酸酶抗体为一抗，对原代培养的毛乳头细胞进行免疫荧光 鉴定，以空白对照和成纤维细胞组为对照。 3、骨形成蛋白．2与成纤维细胞生长因子．2单独及联合作用： FGF．2组：细胞培养液内分别加入终浓度为0、5、10、20ng／mll拘FGF-2； BMP-2和10ng／ml BMP．2和FGF．2联合组：实验组细胞培养液JJl入100ng／ml FGF-2，对照组细胞培养液内无BMP．2和FGF．2。 4、采用CCK．8法检测毛乳头细胞增殖活性。 5、采用碱性磷酸酶活性测试盒检测毛乳头细胞的碱性磷酸酶活性。 BMP．2作用后，采用酶联 6、毛乳头细胞分别被浓度为0、50、100、200ng／ml 免疫吸附法检测细胞培养液内IGF．1的水平。