中国大菱鲆虹彩病毒trbivpcr检测方法的建立及其应用史成银.pdfVIP

第15卷第5期 中国水产科学 VO1．15 N O．5 2008年9月 JoumalofFisherySciencesofChina September2008 中国大菱鲆虹彩病毒 (TRBIV)PCR检测方法的建立及其应用 史成银，黄使，杨冰，刘莉 (中国水产科学研究院黄海水产研究所，农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室，山东青岛266071) 摘要：大菱鲆红体病虹彩病毒 (turbotreddishbodyiridovirus，TRBIV)是中国工厂化养殖大菱鲆的主要病毒性病原之一。 本研究提取了该病毒DNA，依据其主要衣壳蛋白基因序列设计了PCR引物，优化了PCR反应参数，建立了TRBIV的 PCR检测方法，测试了该方法的特异性和灵敏度，并应用该方法开展了TRBIV的流行情况调查及研究了大菱鲆的外观 症状 (红体 )与TRBIV感染的关系。结果显示，本研究建立的TRBIVPCR检测方法可以从相当于 100ng病鱼组织中 或 l0数量级的病毒粒子 巾检出TRBIV，也可以在不杀死被测鱼的情况下，仅从鱼体中抽取少量血液即可在 1天的时 间内完成大量样品的TRBIV检测，但不能从健康大菱鲆脾组织和患淋 巴囊肿牙鲆的囊肿组织中扩增出任何产物，说明 该方法具有很高的灵敏性和特异性；在所调查的山东半岛5家大菱鲆养殖场的l9尾大菱鲆中，7尾为TRBIV阳性或弱 阳性；具有 “红体”症状的大菱鲆应当划分为 “病毒性红体病”、“细菌性红体病”和 “非病原性红体症”3种不同的类型。 本研究为TRBIV的流行情况和传播途径调查、疾病的快速诊断和控制提供了技术手段；调查结果显示TRBIV已遍布 山东半岛沿海地区的大菱鲆主产区，在地域上相距较远的多个大菱鲆养殖场流行，今后需要密切关注该病毒的传播和流 行。[中国水产科学，2008，15(5)：830—836] PCR：检测 关键词：大菱鲆；虹彩病毒：主要衣壳蛋 白基因； 中图分类号：$943 文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(2008)05—0830—07 大 菱 鲆 (Scophthalmusmaximus)是 中 国 北 菱鲆虹彩病毒的检测和疾病 的诊断，为大菱鲆虹彩 方最重要 的工厂化海水养殖鱼类。从2001年开 病毒病的研究和防治提供重要的工具，在TRBIV主 始，在 中国养殖大菱鲆 中流行一种 “病毒性红体 要衣壳蛋 白 (Majorcapsidprotein，MCP)基因研究 病 (Viralreddishbodysyndrome，VRBS)999其 病 的基础上，本研究开展了TRBIV的PCR检测技术 原是大菱鲆红体病虹彩病毒 (Turbotreddishbody 的开发。通过 PCR引物的筛选、反应参数的优化、 iridovirus，TRBIV) 。。研究表明，TRBIV是一种 检测方法特异性和灵敏度测定等一系列研究，建立 鱼类虹彩病毒，其分类地位与真鲷虹彩病毒 (Red 了一种快速、准确、灵敏的TRBIVPCR检测方法，并 应用该方法开展了TRBIV的流行情况调查。 seabreamiridovirus，RSIV)和传染性脾肾坏死病毒 (Infectiousspleenandkidneynecrosisvirus，ISKNV) 1 材料与方法 相近 ，是虹彩病毒科 (Iridoviridae)细胞肿大病毒属 1．1 实验鱼 (Megalocytivirus)的 1个新成员 。 实验用患病毒性红体病大菱鲆分别取 自山东 疾病调查发现，患VRBS的大菱鲆外观病变症 省威海市乳山和烟台市莱州的2个大菱鲆养殖场， 状并不明显，病鱼体表…般无明显损伤，仅鱼体腹面 病鱼具有典型的红体病症状。取病鱼的部分脾脏 沿脊椎骨 附近皮下淤血、发红，鳍及鳍基部充血、发 切成小块置于2．5％的多聚甲醛