Drp-1在糖尿病大鼠坐骨神经中的作用和白藜芦醇的干预影响.pdfVIP

摘 要 糖尿病神经病变是糖尿病并发症中危害较大、致残率高的一类疾病，其发病机制 较为复杂，其中氧化应激和细胞凋亡在糖尿病神经病变的发生中发挥重要作用。 Brownlee等于2001年提出糖尿病并发症的统一机制学说，认为糖代谢异常的经典途径 都是高糖环境下线粒体呼吸链氧自由基生成过多的结果。研究显示，线粒体不仅是产 生氧自由基的主要场所，也是控制细胞凋亡的中心。近年来利用荧光成像和三维成像 技术，发现线粒体是动态的细胞器，不断分裂融合，处于一个动态平衡之中。在哺乳 动物细胞中发现发动相关蛋白1(Drp-1）是介导线粒体分裂的重要执行分子。当Drp-1 超表达后，线粒体持续分裂失去融合分裂的动态平衡，形态发生改变，引起相关凋亡 因子表达水平的改变，诱导细胞凋亡。Tianzheng Yu等人证明持续高糖下细胞内线粒 体碎片增多是ROS过度生成及细胞凋亡的上游因素。由此推测，Drp-1介导的线粒体分 裂增多可能与糖尿病并发症密切相关。近年来对Drp-1在不同组织中的表达及所起的 作用比较关注。由此引起我们思索：在糖尿病神经病变中Drp-1的蛋白表达是否有改 变? Drp-1与凋亡调控因子Bax、Bcl-2及凋亡执行因子Caspase-3之间又有什么关系? Drp-1是否会促进糖尿病神经病变的发生?有何干预办法？ 白藜芦醇是一多酚类植物抗毒素，富含于虎杖、葡萄、决明子和花生等天然植物 中。它具有抗氧化、抗凋亡、抗衰老、抗炎症、神经保护等广泛的药理作用。研究体 外培养视网膜细胞时，证明白藜芦醇通过减少胞内钙离子浓度，下调Bax蛋白表达， 上调Sirt1及Ku70活力，从而抑制Caspase-3活化，表现出抗凋亡作用。因此，我们采 用不同剂量的白藜芦醇干预本实验。 目的：旨在检测Drp-1在糖尿病大鼠坐骨神经中的表达，同时检测Bax、Bcl-2及 Caspase-3的表达水平，观察Drp-1与Bax、Bcl-2、Caspase-3之间的关系，探讨Drp-1 在糖尿病神经病变中的作用。同时采用不同剂量的白藜芦醇干预，观察其对Drp-1的 影响，并通过电镜观察各组大鼠坐骨神经的超微结构，从病理学角度评价白藜芦醇对 糖尿病神经病变的疗效，以此探讨白藜芦醇对糖尿病神经病变的治疗作用及其中可能 的机制。 方法：清洁级雄性SD大鼠70只，随机分成2组，正常组15只，链脲佐菌素处理组55只。 造模成功49只，随机剔除4只后，45只成模大鼠再随机分为糖尿病对照组、白藜芦醇 -1 -1 -1 -1 低剂量组(20mg·kg ·d)、白藜芦醇高剂量组(100mg·kg ·d)，每组15只，进行 相应药物或生理盐水灌胃干预。12周后处死大鼠，取各组坐骨神经。第一部分：观察 各组大鼠的一般情况；采用罗氏血糖仪测出各组大鼠的血糖；应用Real-time PCR检 ‐1 ‐     测各组大鼠坐骨神经中Drp-1的表达水平；免疫组化检测各组Bax、Bcl-2、Caspase-3 的蛋白表达。第二部分：进行白藜芦醇干预，观察白藜芦醇对Drp-1的干预影响，并 透视电镜下观察各组坐骨神经的超微结构。 结果： 1.体重和血糖 至干预结束时，正常组体质量呈生理性正常加重，血糖正常。而糖尿病组和治疗 组体质量增加缓慢，血糖明显升高，与正常组相比有统计学意义(均P0．05)；治疗 组与糖尿病组相比，体重、血糖无明显差异(P0．05)；高剂量治疗组与低剂量治疗 组相比，体重、血糖也无明显差异(P0．05)。 2.大鼠坐骨神经Drp-1 mRNA相对表达量 与正常组比较，糖尿病组和治疗组Drp-1的表达均显著升高（P0.05）；与糖尿病 组比较，各治疗组Drp-1的表达显著降低（P0.05）；与低剂量治疗组比较，高剂量 治疗组Drp-1的表达更低，差异有统计学意义（P0.05）。 3.大鼠坐骨神经Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的比较 糖尿病组与正常组相比，Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高，