E2F3、AR、HIF-1α在PC3中的表达和相互关系.pdfVIP

天津医科大学硕士论文 中文摘要 前列腺癌患者占全部男性癌症患者的11％，占全部男性癌症死亡人数的9％。 我国前列腺癌患病率低于西方国家，但是近年来有逐步上升的趋势。引起前列 腺癌的危险因素尚未明确，但是遗传因素是已经被确认的最重要的因素之一。 前列腺癌患者早期可无任何症状，目前诊断主要靠直肠指检，PSA检查，经 直肠B超，前列腺穿刺活检以及影像学的检查，其各项检查都有一定的缺陷， 可能在早期诊断方面有一定的困难，错失治疗的最佳时期，预后不佳，对患者 造成痛苦。 E2F3基因是最近研究比较热门的基因，其表达与前列腺癌的恶性程度有 关，在前列腺癌的发生发展中起促进作用。E2F3通过与pRb及相关蛋白等多 种细胞周期依赖性蛋白及激酶的相互作用来参与细胞周期的调控，对细胞周期 和DNA的复制有重要的调节作用。E2F3是细胞周期调控过程中起核心作用的 转录因子，控制着细胞增殖过程中众多基因的表达，是细胞合成间期中由G1 进入S期所必需的转录因子。E2F3与视网膜母细胞瘤蛋白 节而起生长抑制作用。E2F3的高表达往往提示预后不良。检测E2F3：-白勺表达有 助于前列腺癌的诊治以及恶性程度和预后的判断。E2F3可望成为诊断前列腺癌 和评估预后的指标。 lm灿是生物进化过程中普遍存在的保守的现象，它是由小的、双链的RNA 所激发，通过对靶基因的mRNA的降解所导致的基因转录后沉默。RNAi是一 种非常保守的基因沉默机制。在原始生物中RNAi能够保护基因组免受病毒或 者其它基因片段的插入，并且在生物的发育过程中调节众多基因的表达。 腺相关病毒(adeno．associatedVil21S，AAV)载体是近年来研究最为广泛、最受 关注的基因治疗载体。其具有宿主范围广、免疫原性低、安全性高、稳定性好 等特点，AAv载体被认为是未来基因治疗中最有希望的新一代病毒载体。 目的：探讨AAV转染PC3细胞的效率，通过检测E2F3、AR、HⅢ．1Q在 PC3中的表达，分析三者在前列腺癌致病中关系，旨在探讨E2F3、AR在前列 腺癌发生发展中的作用，同时比较细胞增殖指标E2F3、AR和HIF．1a在前列 腺癌中表达的关系。 方法：对PC3细胞进行体外培养，探索细胞生长的最佳条件。用AAV病 毒转染培养的PC3细胞，在荧光显微镜下拍摄转染效果图片。并进行转染率的 计算，探索最佳转染浓度及时间。MTT法探索AAV转染后PC3细胞生长活性， 绘制转染后细胞生长曲线。通过ELISA方法研究E2F3、AR和H球．1Q在PC3 天津医科大学硕士论文 ’ 细胞中表达的相互关系。 次，浆细胞培养液37℃过夜，24hr后用荧光显微镜可观察到绿色荧光的表达， AAV转染PC3最佳浓度为1×105 (P0．05)。荧光化学发光仪检测E2F3、AR和HIF-1a三种蛋白在PC3中均有 荧光蛋白表达。三者之间有一定的关系。 Q在PC3上有一定的相关性。本实验可为后续试验提供参考。 ’． Q ARHIF．1 PC3ELISA 关键词：前列腺癌舢w病毒RNA干扰E2F3 II 天津医科大学硕士论文 一-————二_——————————————————————————————————————————一 Abstract the allcancer of for11％of