microRNA-200c在胃癌SGC7901CDDP细胞中的作用和其机制的研究.pdfVIP

中文摘要 及其机制的研究 摘 要 在我国，胃癌的发病率很高，由于胃癌筛查没有得到普及和重视，大 多数胃癌到中晚期才得到诊断，化疗仍是主要的治疗手段。但是肿瘤原发 或继发性耐药的产生致使肿瘤对化疗不敏感，最终导致治疗的失败。多年 来对耐药相关基因功能的研究揭示了众多的耐药机制，在指导临床治疗中 逐渐显示出重要的作用，然而由于这些基因之间相互缺乏联系，因而所进 行的研究也相对独立。近年来研究显示一类长度为21-25nt的单链非编码 学显示microRNA通过调节不同的基因而发挥重要的生物学效应，从而使 一些看似相互独立的基因之间建立了紧密的联系。在肿瘤耐药方面，研究 显示相同microRNA能够通过调控不同的靶点而影响肿瘤细胞对抗肿瘤 是基础化疗药物之一。SGC7901／CDDP是胃癌顺铂耐药的细胞株。虽然 已有一些关于其耐药机制的报道，但是目前尚未有对该细胞的microRNA 表达谱特征的报道，同时microRNA在胃癌顺铂耐药过程中所起的作用也 没有深入的研究。本研究对SGC7901／CDDP细胞的耐药特性进行了分析； 对SGC7901／CDDP及其亲代顺铂敏感的SGC7901细胞进行microRNA表 筛选出其中差异表达的microRNA，并应用靶点预测软件进行靶点预测及 生物信息学分析，寻找潜在的microRNA靶点或调控通路，以期改善胃癌 中文摘要 通路及凋亡蛋白的间接调控。 分析 microRNA水平寻找到胃癌细胞耐药的机制和改善耐药的潜在治疗靶点。 阿霉素、5．氟脲嘧啶及紫杉醇的药物敏感性；采用microRNA芯片检测两 MicroCosmVersion Targets 能预测到的共同的靶点；同时根据靶点所对应的microRNA表达改变情况 进程进行注释，预测microRNA参与的生物学功能。 结果： l两株细胞对顺铂、阿霉素、5．氟脲嘧啶及紫杉醇的敏感性：不同浓 4．48 1细胞相比， 1+0．544mg／L和1．528：￡-0．097mg／L。与SGC790 低。 2 RNA的浓度分别为：1 中文摘要 1．9~2．0之间，从甲醛变性琼脂糖凝胶电泳结果来看，其18S和28S条带 清晰，亮度比约为l：2，总RNA纯度达到实验要求且无明显降解。 3microRNA芯片检测结果：经Hy3荧光标记、纯化，进行芯片杂交， 图像采集，数据进行归一化处理后，以两种细胞Hy3荧光标记信号强度 的比值≤O．5或≥2为标准判定差异表达microRNA。结果显示：与 microRNA有1 microRNA．302c*、microRNA．488、microRNA．148a、microRNA．141、 1 3 microRNA-2 8—3p、 1 microRNA一943、microRNA一1290、microRNA一5 6a．5p和micmRNA一34b。 4 组共有451个预测靶点，Blast2GO分析显示这些靶点参与信号转导、转 录调控、蛋白质磷酸化、跨膜转运、药物敏感性、细胞周期、分化、凋亡、 预测靶点，Blast2GO分析显示这些靶点参与信号转导、转录调控、跨膜 转运、细胞周期、凋亡、增殖、分化、组织发生等生物学进程。 结论： 顺铂耐药性显著增高外，其对阿霉素、5．氟脲嘧啶及紫杉醇的耐药性也出 现增加，呈现出多药耐药的表型。 microRNA-1290、microRNA一51 细胞中表达上调。 中文摘要 3通过对这些异常改变microRNA的预测靶点进行GO分析，提示这 与了SGC790l／CDDP细胞的多药