MicroRNA-21对中耳胆脂瘤细胞增殖及凋亡的调控作用.pdfVIP

中文摘要 MicroRNA．2 1对中耳胆脂瘤细胞增殖 和凋亡的调控作用 博士研究生：陈晓华 导 师：秦兆冰教授 郑州大学第一附属医院 河南郑州450052 摘要 中耳胆脂瘤是一种常见多发病，以中耳腔内高度增殖的角化鳞状上皮的积 存，临近骨质的破坏为主要特征。胆脂瘤虽是一种良性病变，却具有恶性肿瘤 样生物学行为，如侵袭性、迁移性、破坏性、复发性、高度增殖和分化变异性。 中耳胆脂瘤所引起的骨质破坏可导致听力下降，内耳功能紊乱，面神经麻痹， 甚至颅内并发症。临床观察发现，儿童胆脂瘤较成人更具侵袭性和危险性。多 数学者认为，儿童胆脂瘤生长速度快，易于扩散，病变范围广泛，并且术后复 发率明显高于成人。目前的治疗方法主要是手术切除，但由于术后易于复发或 残留，常需多次手术，故并发症的发生和听功能的障碍尤为严重。 胆脂瘤发生的确切机制目前尚不明确。近年来，国内外学者从组织酶学、 癌基因、细胞因子、生长因子及其受体等方面对胆脂瘤发生的分子机制进行了 研究。结果发现，中耳胆脂瘤组织中许多生长因子和信号分子基因表达上调， 同时与细胞增殖、分化、凋亡及骨质破坏相关的蛋白质表达也明显增强。尽管 有关胆脂瘤细胞凋亡能力的研究结果仍存在分歧，但大量研究证实，与正常皮 肤相比胆脂瘤上皮具有类似肿瘤细胞一样高度增殖的能力。 新近的研究发现， 细胞的基本生物过程包括增殖、分化和死亡均受一类长 的结合位点沉默靶基因表达来调控。miRNA是蛋白质翻译过程中重要的调节子， 中文摘要 与肿瘤和异常增生性疾病的发生密切相关。据计算分析，大约miRNA的数量占 到蛋白编码基因的1％，而高达30％的蛋白编码基因可能受到miRNA的调控。 miRNA．21是人类细胞或组织中存在较为广泛的一个miRNA，主要通过其靶基 因磷酸酶张力蛋白同源物(The tension phosphatase celldeathfactor-4，PDCD4)在调控肿瘤异常增 性细胞凋亡因子-4(Programmed 殖的过程中发挥着重要作用，因此又被称为“癌基因”。在炎症等的病理条件下， 如LPS诱导的鼠的肺部炎症、过敏性呼吸道炎症、骨关节炎、银屑病、大肠炎、 症的连接桥梁。 有关miRNA对胆脂瘤上皮细胞增殖、分化和死亡调控作用的研究报道甚少。 与肿瘤发生相关的miRNA的表达情况，发现miRNA．21调控胆脂瘤上皮的生长 和增殖。201 miRNA) let．7a参与了胆脂瘤细胞凋亡调控作用，并且其调控模式不同于肿瘤细胞，而更 类似于let．7a对损伤或炎症的调控。然而迄今为止，在细胞体外模型对胆脂瘤的 发生和调控机制进行深入研究和干预实验尚未见报道。 本研究目的 瘤组织中的表达情况， 研究miRNA．21对儿童和成人中耳胆脂瘤上皮增殖和凋 亡的作用。 2．建立中耳胆脂瘤细胞体外研究模型，研究miRNA．21和其下游靶基因 PTEN、PDCD4蛋白在胆脂瘤角质细胞中的表达情况。 3．以介导miRNA．21抑制体的慢病毒载体感染培养的胆脂瘤角质细胞，观 蛋白表达的影响，以及细胞增殖、凋亡能力和侵袭性的改变，为开展基于miRNA 的基因治疗或联合治疗提供实验依据。 中文摘要 第一部分MiRNA．21在儿童和成人中耳胆脂瘤组织中的表达研究 方法 1．提取21例成人(年龄≥18岁)中耳胆脂瘤组织及其耳后正常皮肤组织， 2l例儿童(年龄S14岁)中耳胆脂瘤及其耳后正常皮肤组织中的miRNAs，利用 紫外分光光度仪检测miRNAs的浓度和纯度。 2．利用荧光定量PCR技术检测儿童、成人中耳胆