MicroRNA34a在绒毛膜细胞癌细胞株JEG-3中的表达和作用研究.pdfVIP

中文摘要 摘 要 CC)是一种高度恶性的肿瘤，早期即可 目的：绒癌(choriocarcinoma 发生血行转移，导致全身播散。虽然目前化疗效果比较好，但随着耐药病 例的出现，使绒癌的治疗出现了新的困难。因此，如何提高这部分患者的 类广泛存在于真核生物中，长度约为22个核苷酸的非编码单链小分子 其翻译，从而在转录后水平对基因的表达进行调控。它们与人类的生长发 育、干细胞分化与自我更新以及肿瘤、心脏疾病、艾滋病等多种疾病关系 密切，尤其在肿瘤的发生发展过程中，扮演着重要角色。miR-34最先发 现于线虫，并在一些非脊椎动物中保持同源性，是一类保守的、非编码 的预测结果表明：成熟mir-34a序列位于其主基因原初转录本外显子l下 含子l内；mir-34c序列位于同一主基因原初转录本的外显子2内。根 14位歪第9、134、 lp36．23，其茎环结构序列位于1号染色体第9、134、3 1 位于ll l号染色体第10、888、873位至 q23．1，前者茎环结构序列位于1 D1以及Cyclin E2的表达，使肿瘤细胞停滞在Gl期，抑制肿瘤细胞的生长，诱导肿瘤 自身和p53的作用。最近研究证实，miR34能够在多种肿瘤细胞中表达： 人类结肠癌的发展过程中miR34a的表达下调，在胰腺癌肿瘤细胞和儿童 中文摘要 miR34a的表达能够抑制细胞增殖并激活细胞凋亡途径。这些研究表明m iR34a表达的下调或缺失与肿瘤的发生和细胞增殖之间存在着联系，m iR34a的表达对抑制细胞增殖，激活细胞凋亡途径有重要意义。Valery 性肿瘤发生的应激条件下促进细胞生长停滞和死亡的发生。P53基因做为 ～种细胞增殖负调节因子，调控细胞的生长和分化，维持基因组DNA的稳 定，其突变或缺失所致的P53失功能可能在肿瘤发生、发展中起着重要的 作用。研究发现P53基因与滋养细胞肿瘤的生物学行为有密切关系。P53 基因的表达与葡萄胎滋养细胞的增生程度有关，并且P53的细胞凋亡调控 水平失衡对于葡萄胎由良性转变为恶性起了重要作用。同时研究发现，在 通过应用依托泊苷作用于入绒毛膜癌细胞株JEG。3，以期上调 同药物作用时间内miR34a表达情况，并检测不同时间JEG．3绒癌细胞增 殖和凋亡的情况，探讨miR34a在绒癌发生发展过程中的作掰，为绒癌的 诊断和基因治疗提供理论依据。 细胞培养箱中培养。2．利用临床应用化疗药依托泊营体外上调入绒毛膜癌 JEG．3细胞中miR34磙达，将培养细胞分为：对照组(常规培养，未进行 法检测各组细胞miR34a表达情况，实验重复三次。5。四甲基偶氮唑蓝(MTT) 法检测各组细胞增殖能力，实验设4个平行复孔。6．流式细胞仪检测各组 细胞凋亡率，实验重复三次。7．采用SPSS13。0统计软件对所有数据进行 统计学分析。数据以均数±标准差(i圭S)表示，两组闻均数比较用t检验， 多组闻均数比较正态、方差齐采用单因素方差分析，非正态或方差不齐采 用秩检验，p0．05为无显著性差异，pO。05为具有显著性差异，所有实验 均重复3次。 中文摘要 结果：1．绒毛膜癌JEG．3细胞用含有15％(体积分数)胎牛血清的 良好，细胞贴壁生长、椭圆形或圆形、排列紧密、大小均匀、边界清楚、 细胞膜完整，细胞核界限清晰，胞浆中可见黑色分泌颗粒。2．用药6．24 小时，部分贴壁细胞死亡，漂浮于培养液中，剩余细胞形态尚好，用药 48小时，大部分贴壁细胞死亡，漂浮于培养液中，剩余细胞形态渐不规 则，细胞大小不等，有的细胞可有长的伪足，胞浆中黑色颗粒增多。3．绒 1．378士0．51 表达水平为5．423土3．611，较对照组上调442．3％，与对照组比较差异有统 计学意义(PO．0504．MTT法检测各组细胞增殖能力：6